二胺(an)氧(yang)化(hua)酶(mei)（DAO）測試盒(he)操作(zuo)步驟(zhou)

二胺氧(yang)化(hua)酶(mei)(DAO)測試盒(he)操作(zuo)步驟(zhou)：

.標準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)與加樣：在酶標包(bao)被板上設標(biao)準品(pin)孔(kong)0孔(kong)，在(zai)第壹、第(di)二(er)孔中(zhong)分(fen)別(bie)加標(biao)準品(pin)00μl，然(ran)後在第壹、第(di)二(er)孔中(zhong)加標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)；然後從第壹孔(kong)、第(di)二孔(kong)中各取(qu)00μl分(fen)別(bie)加到(dao)第(di)三孔和第四孔，再(zai)在(zai)第三、第四孔(kong)分(fen)別(bie)加標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)；然後在第三孔和第四孔中(zhong)先(xian)各取(qu)50μl棄(qi)掉，再(zai)各(ge)取50μl分(fen)別(bie)加到(dao)第(di)五(wu)、第六孔(kong)中，再(zai)在(zai)第五(wu)、第(di)六孔中(zhong)分(fen)別(bie)加標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50ul，混勻(yun)；混勻(yun)後從第五、第(di)六(liu)孔(kong)中各(ge)取50μl分(fen)別(bie)加到(dao)第(di)七(qi)、第八孔(kong)中，再(zai)在(zai)第七(qi)、第(di)八孔中(zhong)分(fen)別(bie)加標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)後從第七、第(di)八(ba)孔(kong)中分(fen)別(bie)取50μl加(jia)到(dao)第(di)九、第十(shi)孔中(zhong)，再(zai)在(zai)第九(jiu)第(di)十孔分(fen)別(bie)加標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)後從第九第(di)十(shi)孔(kong)中各(ge)取50μl棄(qi)掉。
2.加樣(yang)：分(fen)別(bie)設空白(bai)孔（空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣品及酶(mei)標試(shi)劑，其余各步操作(zuo)相同(tong)）、待(dai)測樣品孔。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板上待測樣品孔中(zhong)先(xian)加樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然後再(zai)加(jia)待測樣品0μl（樣品(pin)最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為5倍(bei)）。加樣(yang)將樣(yang)品加於酶(mei)標板孔(kong)底部，盡量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁，輕輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻(yun)。
3.溫育：用封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育30分(fen)鐘。
4.配液：將30（48T的(de)20倍）倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液用蒸餾(liu)水30（48T的(de)20倍）倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)。
5.洗(xi)滌：小心揭(jie)掉封板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液，靜置(zhi)30秒(miao)後棄去，如此重復(fu)5次，拍幹。6.加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標(biao)試劑50μl，空白(bai)孔除(chu)外(wai)。
7.溫(wen)育：操作(zuo)同3。
8.洗(xi)滌：操作(zuo)同5。
9.顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加入顯色(se)劑A50μl，再(zai)加(jia)入顯色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)5分(fen)鐘.
0.終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終止反應（此時(shi)藍色(se)立轉黃(huang)色(se)）。
.測定：以(yi)空白(bai)空調零，450nm波長依(yi)序測量各孔的(de)吸光(guang)度（OD值）。 測定應在加(jia)終(zhong)止液後5分(fen)鐘以內(nei)進(jin)行(xing)。