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倉(cang)鼠(shu)活(huo)化(hua)素(su)BELISA檢測試(shi)劑盒操(cao)作步驟:
. 標(biao)準品的(de)稀(xi)釋與(yu)加樣(yang):在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)設標(biao)準品孔(kong)0孔,在(zai)di壹(yi)、第二孔(kong)中(zhong)分別(bie)加標(biao)準品00μl,然後(hou)在(zai)di壹(yi)、第二孔(kong)中(zhong)加標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)50μl,混(hun)勻(yun);然後(hou)從di壹(yi)孔、第二孔(kong)中(zhong)各取(qu)00μl分別(bie)加到第三孔和第四(si)孔(kong),再(zai)在(zai)第三、第四(si)孔(kong)分別(bie)加標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)50μl,混(hun)勻(yun);然後(hou)在(zai)第三孔和第四(si)孔(kong)中(zhong)先各取(qu)50μl棄掉(diao),再(zai)各取(qu)50μl分別(bie)加到第五(wu)、第六孔(kong)中(zhong),再在(zai)第五(wu)、第六孔(kong)中(zhong)分別(bie)加標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)50ul,混(hun)勻(yun);混(hun)勻(yun)後(hou)從第五(wu)、第六孔(kong)中(zhong)各取(qu)50μl分別(bie)加到第七、第八(ba)孔中(zhong),再在(zai)第七、第八(ba)孔中(zhong)分別(bie)加標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)50μl,混(hun)勻(yun)後(hou)從第七、第八(ba)孔中(zhong)分別(bie)取(qu)50μl加到第九、第十孔(kong)中(zhong),再在(zai)第九第十孔(kong)分別(bie)加標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)50μl,混(hun)勻(yun)後(hou)從第九第十孔(kong)中(zhong)各取(qu)50μl棄掉(diao)。(稀(xi)釋後(hou)各孔加樣(yang)量(liang)都(dou)為(wei)50μl,濃(nong)度(du)分別(bie)為(wei)80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。
2. 加樣(yang):分別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔(空白(bai)對照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品及酶(mei)標(biao)試(shi)劑,其余(yu)各步操(cao)作相(xiang)同(tong))、待(dai)測樣品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)待(dai)測樣品(pin)孔中(zhong)先加樣(yang)品稀釋液(ye)40μl,然後(hou)再加待(dai)測樣品(pin)0μl(樣品最(zui)終稀(xi)釋度(du)為5倍(bei))。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加於酶標(biao)板(ban)孔(kong)底部(bu),盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi),輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。
3. 溫育(yu):用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
4. 配(pei)液(ye):將(jiang)30(48T的(de)20倍(bei))倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水30(48T的(de)20倍(bei))倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備用(yong)。
5. 洗(xi)滌:小心(xin)揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo),棄去液(ye)體(ti),甩幹,每孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye),靜(jing)置(zhi)30秒後(hou)棄去(qu),如此重(zhong)復5次,拍(pai)幹。
6. 加酶(mei):每孔加入(ru)酶標(biao)試(shi)劑50μl,空白孔(kong)除外。
7. 溫(wen)育(yu):操(cao)作同3。
8. 洗滌:操(cao)作同5。
9. 顯色:每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯色(se)劑A50μl,再加入(ru)顯色(se)劑B50μl,輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃避光顯(xian)色5分鐘(zhong).
0. 終止(zhi):每(mei)孔(kong)加終止(zhi)液(ye)50μl,終止(zhi)反(fan)應(此時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色)。
. 測定:以空白(bai)空(kong)調零,450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各孔的(de)吸光度(du)(OD值(zhi))。 測定應(ying)在(zai)加終止(zhi)液(ye)後(hou)5分鐘(zhong)。
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