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乙(yi)酰(xian)羧(suo)化酶(ACC)操(cao)作流(liu)程描敘:
、將(jiang)要進行(xing)實(shi)驗的版孔(kong)進行(xing)設定(ding)好(hao),標(biao)準品(pin) 5 個點(dian),每(mei)個點(dian)設定(ding)平(ping)行,需(xu)要用到(dao) 0 個孔(kong),空(kong)白(bai)只(zhi)需(xu) 個孔(kong)。剩下(xia)孔(kong)可以做(zuo)為樣(yang)本(ben)孔(kong)
2、 稀釋(shi)標(biao)準,準備好(hao) 5 個 EP 管(guan),然(ran)後在每個 EP 管(guan)中加入 50 微升(sheng)標(biao)準稀釋(shi)液,編(bian)上(shang)編碼(ma),分別(bie)為 ,2,3,4,5,在(zai) 號(hao)管(guan)中加入 50 標(biao)準品(pin),用(yong)槍(qiang)頭反(fan)復吹打 0 次左右(註(zhu)意(yi)控制幅(fu)度不要過(guo)大容(rong)易產(chan)生氣(qi)泡)如(ru)果有(you)渦旋(xuan)儀(yi)可以在(zai)渦(wo)旋(xuan)儀上渦(wo)旋(xuan) 5 秒左右,然(ran)後換槍(qiang)頭,在(zai) 號(hao)管(guan)中取 50 微(wei)升(sheng)加入到(dao) 2 號(hao)管(guan),後面過(guo)程壹(yi)次(ci)類推。最(zui)後(hou)稀釋(shi)完,前面 4 個管(guan)中每管液體(ti)在 50 微(wei)升(sheng),5 號(hao)管(guan)為 300 微(wei)升(sheng)。濃(nong)度是(shi)從(cong)大到(dao)小。
3、 標(biao)準、樣本(ben)、空白(bai)加樣:標(biao)準是每(mei)個濃(nong)度點(dian) 2 個孔(kong)(做(zuo)平行),每孔(kong)加入 50 微升(sheng),加樣過(guo)程中註(zhu)意(yi)換槍(qiang)頭,樣(yang)本孔(kong)中每孔(kong)加入 50 微升(sheng),加樣過(guo)程中註(zhu)意(yi)換槍(qiang)頭,空(kong)白(bai)孔(kong)加入 50 微升(sheng)標(biao)準稀釋(shi)液或(huo)者樣(yang)本稀釋(shi)液。特(te)別(bie)要說(shuo)明(ming)的是,標(biao)準加樣和(he)樣本(ben)加樣盡量控制在(zai) 5 分鐘(zhong)內加完,如(ru)果時(shi)間(jian)拖的太(tai)長(chang),會導(dao)致前面孔(kong)先(xian)反應後面孔(kong)才(cai)開始(shi)反(fan)應(ying),這(zhe)樣數值偏(pian)差(cha)過(guo)大。加完樣後(hou)蓋(gai)上封板(ban)膜,至(zhi) 37 攝(she)氏(shi)度孵育(yu) 30 分鐘(zhong).
4、洗版,在(zai)孵育(yu)過(guo)程中可以將(jiang)洗(xi)滌(di)液配(pei)好(hao),20 ml30 倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液用(yong)蒸(zheng)餾水或(huo)者去(qu)離子(zi)水定(ding)容(rong)到(dao) 600 ml 即可。每孔(kong)加入 250-300 微升(sheng)的洗滌(di)液(不要漫(man)過(guo)版孔(kong)),(如(ru)果有(you)震蕩(dang)儀(yi)的話(hua),可以講(jiang)板(ban)子(zi)放入震(zhen)蕩儀(yi)上(shang) 5 秒左右,然(ran)後靜止(zhi)三十秒,沒有請(qing)忽略(lve)次(ci)過(guo)程)將(jiang)板(ban)子(zi)在桌(zhuo)子(zi)上晃(huang)動 5 秒左右,然(ran)後靜置(zhi) 30 秒,甩幹,拍(pai)板(ban)。說(shuo)明(ming):甩(shuai)幹(gan)過(guo)程盡量要快, 秒內就可以完(wan)成(cheng),不要慢慢傾(qing)斜(xie)倒(dao)掉液體(ti),直接翻(fan)板(ban)甩(shuai)掉(diao)液體(ti)即可。拍(pai)板(ban)過(guo)程需(xu)要在桌(zhuo)子(zi)上墊壹(yi)層(ceng)吸水紙或(huo)者濾(lv)紙,版孔(kong)朝(chao)下拍(pai)幾(ji)下,拍(pai)幹(gan)區(qu)別(bie)主要看吸水(shui)紙(zhi)和(he)濾紙(zhi)上(shang)沒(mei)有(you)明(ming)顯(xian)的水漬(zi)為完(wan)成(cheng)。
5、每孔(kong)加入 50 微升(sheng)的酶標(biao)試(shi)劑,此(ci)處(chu)在空白(bai)孔(kong)中不需(xu)要加(空白(bai)孔(kong)為空(kong)),孵育(yu) 30 分鐘(zhong)。
6、 洗版同步(bu)驟 4
7、顯色(se),先(xian)每孔(kong)中加入 50 微升(sheng)的顯色(se) A 液,然(ran)後(hou)每(mei)孔(kong)中加入 50 微升(sheng)顯色(se) B 液(ye)。避(bi)光(guang) 37 攝(she)氏(shi)度顯(xian)色(se) 5 分鐘(zhong)
8、終(zhong)止,每孔(kong)加入 50 微升(sheng)的終(zhong)止液,註(zhu)意(yi),加完終(zhong)止液必(bi)須(xu)在(zai) 5 分鐘(zhong)內讀(du)數,超過(guo)時(shi)間(jian)讀(du)數無效(xiao)。在(zai)規定(ding)時(shi)間(jian)內讀(du)數都是(shi)有(you)效(xiao)的。
9、至(zhi)此(ci),整(zheng)個實(shi)驗(yan)結束(shu)。
酸(suan)性(xing)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)生長(chang)因(yin)子(zi)(aFGF)ELISA試劑盒(he)
松(song)弛肽/松(song)弛素(RLN)ELISA試(shi)劑盒(he)
松(song)弛素(RLN)ELISA試(shi)劑盒(he)
四(si)氫(qing)生物(wu)蝶呤(ling)(BH4)ELISA試劑盒(he)
四(si)連接(jie)素(CLEC3B)ELISA試(shi)劑盒(he)
死(si)亡相(xiang)關蛋(dan)白(bai)(DAP/DAP)ELISA試(shi)劑盒(he)
絲狀(zhuang)血(xue)球(qiu)凝集(ji)素(FHA)ELISA試(shi)劑盒(he)
絲裂原(yuan)激(ji)活的蛋(dan)白(bai)激(ji)酶/MAP激(ji)酶(MAPK)ELISA試劑盒(he)
絲裂原(yuan)活化蛋(dan)白(bai)激(ji)酶激(ji)酶6(MKK6)ELISA試劑盒(he)
絲裂原(yuan)活化蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(MAPK)ELISA試劑盒(he)
肽酶(mei)2甘(gan)露(lu)聚糖(tang)結合(he)凝集(ji)素(MASP2)ELISA試(shi)劑盒(he)
蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑制(zhi)因(yin)子(zi)肽酶(mei)抑(yi)制(zhi)因(yin)子(zi)進化枝3G(Serpina3g)ELISA試(shi)劑盒(he)
蛋(dan)白(bai)酶(mei)HTRA(HTRA)ELISA試劑盒(he)
蛋(dan)白(bai)酶(mei)(PRSS)ELISA試劑盒(he)
/激(ji)酶24(STK24)ELISA試劑盒(he)
/蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸(suan)酶(mei)(STK)ELISA試劑盒(he)
/蛋(dan)白(bai)激(ji)酶PAK4(PAK4)ELISA試劑盒(he)
/蛋(dan)白(bai)激(ji)酶B-raf(BRAF)ELISA試劑盒(he)
水(shui)蛭(zhi)素(HRD)ELISA試(shi)劑盒(he)
水(shui)閘(zha)蛋(dan)白(bai)4(CLDN4)ELISA試(shi)劑盒(he)
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