人(ren)CD44變體(ti)6ELISA檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)​操(cao)作(zuo)步驟

人(ren)CD44變體(ti)6ELISA檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)步驟：

. 標(biao)準(zhun)品(pin)的稀釋(shi)與加樣：在酶(mei)標(biao)包被板(ban)上設(she)標準(zhun)品(pin)孔0孔，在di壹、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)00μl，然後(hou)在(zai)di壹、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)加標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然後(hou)從(cong)di壹孔(kong)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)各取(qu)00μl分(fen)別加(jia)到(dao)第(di)三(san)孔(kong)和第(di)四(si)孔，再在(zai)第(di)三(san)、第(di)四(si)孔分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然後(hou)在(zai)第(di)三(san)孔(kong)和第(di)四(si)孔中先(xian)各取(qu)50μl棄掉(diao)，再各取50μl分(fen)別加(jia)到(dao)第(di)五、第(di)六孔(kong)中，再(zai)在第(di)五、第(di)六孔(kong)中分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)五、第(di)六孔(kong)中各(ge)取50μl分(fen)別加(jia)到(dao)第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中(zhong)，再在第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中(zhong)分(fen)別取(qu)50μl加(jia)到第(di)九、第(di)十(shi)孔(kong)中，再在(zai)第(di)九第(di)十(shi)孔(kong)分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九第(di)十(shi)孔(kong)中各取(qu)50μl棄掉(diao)。（稀釋(shi)後(hou)各(ge)孔(kong)加(jia)樣量都為50μl，濃度分(fen)別為80 ng/L，20 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，5 ng/L）。

2. 加樣(yang)：分(fen)別設(she)空(kong)白孔(kong)（空白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣品(pin)及酶標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步操(cao)作(zuo)相同）、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔。在酶標(biao)包被板(ban)上待(dai)測樣(yang)品(pin)孔中先加(jia)樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品(pin)0μl（樣品(pin)最終稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣品(pin)加於酶標(biao)板(ban)孔底(di)部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔壁，輕輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍）倍濃(nong)縮洗(xi)滌液(ye)用蒸(zheng)餾水(shui)30（48T的20倍）倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)。

5. 洗(xi)滌：小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜置30秒後(hou)棄去，如此重(zhong)復(fu)5次，拍(pai)幹。

6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加入酶標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔除(chu)外。

7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。

8. 洗滌：操(cao)作(zuo)同5。

9. 顯色(se)：每(mei)孔(kong)先加入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕震蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)5分(fen)鐘(zhong).

0. 終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加終止液(ye)50μl，終止(zhi)反(fan)應（此時藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。

. 測定：以空(kong)白空調(tiao)零，450nm波長依(yi)序(xu)測量各(ge)孔的(de)吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)）。 測(ce)定應在加(jia)終止液(ye)後(hou)5分(fen)鐘(zhong)。

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；HT-29

人(ren)巨細(xi)胞(bao)白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)株(zhu)；Mo7e

人(ren)非小細(xi)胞肺腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；NCI-H57

人(ren)前列腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；PC-3 [PC3]

人(ren)紅系(xi)白(bai)血病(bing)細(xi)胞(bao)；TF-

人(ren)乳腺(xian)導(dao)管(guan)瘤(liu)細(xi)胞(bao)；UACC82

人(ren)類原(yuan)巨(ju)核細(xi)胞型(xing)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)；UT-7

人(ren)惡(e)性(xing)黑(hei)色(se)素瘤(liu)細(xi)胞(bao)；A-375 [A375]

人(ren)乳腺(xian)導(dao)管(guan)瘤(liu)細(xi)胞(bao)；BT-474

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；COLO 205

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；COLO 320DM [COLO320DM]

人(ren)Burkkit淋巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞(bao)；Daudi

人(ren)十二(er)脂腸腺(xian)癌(ai)；HuTu-80

人(ren)鼻咽(yan)癌(ai)細胞(bao)；CNE-2Z

人(ren)胎盤(pan)絨膜(mo)癌(ai)細胞(bao)；BeWo

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；HCT 6 [HCT6]

人(ren)T淋巴(ba)瘤(liu)轉(zhuan)基(ji)因(yin)細胞(bao)；Jurkat D,E

人(ren)T淋巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞(bao)Jurkat亞(ya)系(xi)；Jurkat77

人(ren)口腔(qiang)表皮(pi)樣癌(ai)細胞(bao)；KB

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；LoVo

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；SW480 [SW 480；SW-480]

急性(xing)T淋巴(ba)細胞(bao)白(bai)血病(bing)細(xi)胞(bao)；TALL-04

人(ren)腎癌(ai)細胞(bao)；A498

人(ren)宮頸癌(ai)細胞(bao)；C-33A

人(ren)宮頸癌(ai)細胞(bao)；Hela 229 [HeLa229]

人(ren)宮頸癌(ai)細胞(bao)；Hela P0s-F

人(ren)宮頸癌(ai)細胞(bao)；Hela S3 [HeLaS3]

人(ren)胰腺(xian)腺(xian)泡(pao)上(shang)皮(pi)癌(ai)；HPAC

人(ren)T淋巴(ba)細胞(bao)白(bai)血病(bing)細(xi)胞(bao)；HuT 78

人(ren)肺鱗(lin)癌(ai)細胞(bao)；NCI-H520

人(ren)前列腺(xian)癌(ai)高轉(zhuan)移(yi)細(xi)胞(bao)株；PC-3M IE8

人(ren)前列腺(xian)癌(ai)低(di)轉移細胞(bao)株；PC-3M-2B4

人(ren)肺巨(ju)細(xi)胞癌(ai)高轉(zhuan)移(yi)細(xi)胞(bao)株；PG-BE

人(ren)肺巨(ju)細(xi)胞癌(ai)低(di)轉移細胞(bao)株；PG-LH7

人(ren)結(jie)直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；SW620 [SW 620；SW-620]

人(ren)腦星形(xing)膠(jiao)質母細胞瘤(liu)；U-87 MG [U87MG；U87 MG]

人(ren)肺癌(ai)細胞(bao)；A-427 [A427]

人(ren)胰腺(xian)癌(ai)細胞(bao)；AsPC-

人(ren)侵襲性(xing)脈(mai)絡膜(mo)黑(hei)色(se)素瘤(liu)細(xi)胞(bao)；C98

人(ren)髓母細胞瘤(liu)細(xi)胞(bao)；Daoy

人(ren)乳腺(xian)導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)；HCC38

人(ren)侵襲性(xing)脈(mai)絡膜(mo)黑(hei)色(se)素瘤(liu)細(xi)胞(bao)；M69

人(ren)胃癌(ai)細胞(bao)；MGC-803

綠(lv)色(se)熒光(guang)蛋(dan)白標(biao)記(ji)人(ren)胃癌(ai)細胞(bao)；MGC803-GFP

人(ren)胃癌(ai)細胞(bao)；MKN-45

人(ren)侵襲性(xing)脈(mai)絡膜(mo)黑(hei)色(se)素瘤(liu)細(xi)胞(bao)；MuM-2B