大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞操作(zuo)要點

       大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞在房(fang)水(shui)流(liu)動機制中(zhong)發(fa)揮重要(yao)作(zuo)用(yong)。在大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞中(zhong)有特定(ding)的神(shen)經遞(di)質(zhi)和(he)神(shen)經肽(tai)受(shou)體(ti)，其中(zhong)包(bao)括腎上(shang)腺素(su)，乙(yi)酰(xian)dan堿和(he)神(shen)經肽(tai)Y。在(zai)小(xiao)梁細(xi)胞中(zhong)，壹(yi)長串的(de)血(xue)管活(huo)性多(duo)肽和(he)生(sheng)長因子能(neng)夠觸(chu)發(fa)細(xi)胞內信(xin)號(hao)傳(chuan)導(dao)機(ji)制。小(xiao)梁網細(xi)胞可(ke)合成不(bu)同類型(xing)的細(xi)胞外基質(zhi)蛋(dan)白以及金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶。公司(si)提(ti)供的(de)大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞，采(cai)用(yong)胰mei消化(hua)制備而(er)來(lai)。細(xi)胞的培養采(cai)用(yong)公司(si)專li產品(pin)大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞培養試劑(ji)盒(he)(RatEyePrimaCell：NormalTrabecularMeshworkCellsCatNo.3-7526)來(lai)優(you)化(hua)目的(de)細(xi)胞生長條(tiao)件(jian)，以降(jiang)低雜(za)細(xi)胞（如脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞、纖維細(xi)胞等）的汙(wu)染(ran)，同時保證質(zhi)量的穩定(ding)。在公司(si)技術(shu)部標準的操作(zuo)流程下，大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞傳(chuan)5代(dai)仍(reng)可(ke)以保持原(yuan)代(dai)細(xi)胞的分(fen)化(hua)狀態(tai)，進(jin)而(er)可(ke)以用(yong)於評(ping)估體外藥(yao)物模型(xing)系(xi)統和(he)調節特定(ding)基因的(de)遺(yi)傳(chuan)功(gong)能(neng)。

大鼠小(xiao)梁網細(xi)胞操作(zuo)要點：

1）將培(pei)養基在37℃水(shui)浴鍋預(yu)熱；準備(bei)壹(yi)個15mL無(wu)菌(jun)的(de)離心管，加(jia)入(ru)8mL預(yu)熱培養基。

2）將凍存細(xi)胞從液氮(dan)罐中(zhong)取(qu)出，快(kuai)速(su)放(fang)入(ru)37℃水浴鍋中(zhong)復(fu)溫(wen)（可(ke)準備(bei)壹(yi)潔(jie)凈(jing)的(de)燒(shao)杯，裝(zhuang)滿37℃的水(shui)，細(xi)胞凍存管取(qu)出後迅速(su)放(fang)入(ru)燒(shao)杯內，再(zai)逐步轉(zhuan)移到(dao)水浴鍋中(zhong)）。輕(qing)輕(qing)晃動(dong)凍存管，使細(xi)胞能在1~2min內(nei)*解凍，使細(xi)胞能盡快(kuai)通過(guo)最易受(shou)損(sun)的(de)溫(wen)度(du)段(duan)（-5~0℃）。註意(yi)凍存管管口不(bu)能沒(mei)入(ru)水中(zhong)，BRL(大鼠肝(gan)細(xi)胞)避(bi)免(mian)引(yin)起(qi)汙(wu)染(ran)。

3）用(yong)75%酒精擦拭(shi)凍存管後再(zai)置(zhi)於超(chao)凈(jing)臺(tai)內(nei)，將(jiang)管內(nei)細(xi)胞轉(zhuan)移至(zhi)準備好(hao)的離心管內(nei)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)液體(ti)，使細(xi)胞均(jun)勻分(fen)散(san)，降(jiang)低DMSO濃(nong)度(du)，吹(chui)打(da)時避(bi)免(mian)產生(sheng)氣泡(pao)。用(yong)新鮮培(pei)養基洗管壁(bi)2次(ci)，均(jun)轉(zhuan)移至(zhi)離心管內(nei)。

4）800rpm離心5min，棄上(shang)清，加(jia)入(ru)新鮮的(de)培(pei)養基，吹(chui)打(da)制成細(xi)胞懸(xuan)液。

5）將細(xi)胞懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi)T25細(xi)胞瓶(ping)內，補(bu)加(jia)適(shi)量的(de)培養基，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)細(xi)胞瓶(ping)使細(xi)胞分(fen)布(bu)均(jun)勻，放(fang)入(ru)溫(wen)箱內(nei)培(pei)養。

6）第二(er)天(tian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞貼壁(bi)生(sheng)長情況，換(huan)新鮮培(pei)養基以去除死(si)細(xi)胞。繼續(xu)培養，待細(xi)胞長至80~90%匯(hui)合時正(zheng)常傳(chuan)代(dai)。壹(yi)般剛(gang)復(fu)蘇的(de)細(xi)胞需經過(guo)2~3次傳(chuan)代(dai)，細(xi)胞活力恢(hui)復(fu)後才(cai)能(neng)進(jin)行(xing)後續(xu)的實(shi)驗(yan)。