皮(pi)膚(fu)黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細胞培(pei)養(yang)細胞註(zhu)意(yi)事項(xiang)

皮(pi)膚(fu)黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細胞培(pei)養(yang)細胞註(zhu)意(yi)事項(xiang):

實(shi)驗(yan)進(jin)行前(qian)，無菌室及(ji)無菌操作(zuo)臺(tai)（laminarflow）以紫外(wai)燈(deng)照(zhao)射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦(ca)拭無(wu)菌操作(zuo)擡(tai)面，並(bing)開啟(qi)無菌操作(zuo)臺(tai)風扇(shan)運轉(zhuan)0分鐘後，才(cai)開始(shi)實(shi)驗(yan)操作(zuo)。每次(ci)操(cao)作(zuo)只處(chu)理壹株細胞株，且即(ji)使(shi)培養(yang)基相(xiang)同(tong)亦(yi)不共(gong)享(xiang)培養(yang)基，以(yi)避(bi)免失(shi)誤(wu)混淆(xiao)或(huo)細胞間汙(wu)染。實(shi)驗(yan)完畢後，將(jiang)實(shi)驗(yan)物品帶出工作(zuo)臺(tai)，以70%ethanol擦(ca)拭無(wu)菌操作(zuo)擡(tai)面。操(cao)作(zuo)間隔(ge)應(ying)讓無菌操作(zuo)臺(tai)運轉(zhuan)皮(pi)膚(fu)黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細胞無(wu)菌操作(zuo)工作(zuo)區(qu)域(yu)應保(bao)持(chi)清(qing)潔及(ji)寬敞(chang)，必(bi)要(yao)物品，例如試(shi)管架(jia)、吸(xi)管吸(xi)取(qu)器(qi)或(huo)吸(xi)管盒(he)等可以(yi)暫(zan)時放(fang)置(zhi)，其它(ta)實(shi)驗(yan)用品用完即應移(yi)出，以(yi)利(li)於氣流(liu)之(zhi)流通(tong)。實(shi)驗(yan)用品以70%ethanol擦(ca)拭後才(cai)帶(dai)入(ru)無(wu)菌操作(zuo)臺(tai)內(nei)。實(shi)驗(yan)操作(zuo)應(ying)在擡(tai)面之(zhi)無菌區(qu)域(yu)，勿在邊緣(yuan)之(zhi)非無(wu)菌區(qu)域(yu)操作(zuo)。

小(xiao)心(xin)取(qu)用無菌之(zhi)實(shi)驗(yan)物品，避(bi)免造成(cheng)汙染。勿碰(peng)觸吸(xi)管尖頭(tou)部(bu)或(huo)是(shi)容(rong)器(qi)瓶(ping)口，亦(yi)不要(yao)在打開之(zhi)容器(qi)正(zheng)上(shang)方(fang)操作(zuo)實(shi)驗(yan)。容器(qi)打(da)開後，以(yi)手(shou)夾(jia)住(zhu)瓶(ping)蓋並(bing)握(wo)住(zhu)瓶(ping)身，傾斜約(yue)45°角(jiao)取(qu)用，盡(jin)量勿將(jiang)瓶(ping)蓋蓋口朝(chao)上(shang)放(fang)置(zhi)桌面。

工作(zuo)人員應註(zhu)意(yi)自身(shen)之(zhi)安(an)全(quan)，須穿(chuan)戴(dai)實(shi)驗(yan)衣(yi)及(ji)手(shou)套後才(cai)進(jin)行實(shi)驗(yan)。對於來自人類或(huo)是(shi)病(bing)毒(du)感(gan)染之(zhi)細胞株應特(te)別小心(xin)操作(zuo)，並(bing)選擇(ze)適當等級之(zhi)無菌操作(zuo)臺(tai)（至少(shao)ClassⅡ）。操作(zuo)過(guo)程中(zhong)，應(ying)避(bi)免引起aerosol之(zhi)產生，小(xiao)心(xin)毒性(xing)藥品，例如DMSO及(ji)TPA等，並(bing)避(bi)免尖(jian)銳(rui)針頭(tou)之(zhi)傷害(hai)等。

定(ding)期檢(jian)測下(xia)列項(xiang)目：5.CO2鋼瓶(ping)之(zhi)CO2壓(ya)力(li)5.2CO2培養(yang)箱之(zhi)CO2濃度(du)、溫度(du)、及(ji)水盤是否有汙(wu)染（水盤的水用無菌水，每周更(geng)換）。5.3.無(wu)菌操作(zuo)臺(tai)內(nei)之(zhi)airflow壓(ya)力(li)，定期(qi)更(geng)換紫外(wai)線(xian)燈管及(ji)HEPA過(guo)濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。6.水槽可添加(jia)消毒(du)劑(ji)（Zephrin:750），定期(qi)更(geng)換水槽的水

粉(fen)末(mo)培養(yang)基配(pei)制好後（加(jia)了(le)血清(qing)），壹般(ban)在4度盡(jin)量不要(yao)超(chao)過(guo)個(ge)月(yue)，如(ru)在-20度存放時(shi)間可長(chang)壹些，但也(ye)不要(yao)超(chao)過(guo)3-4個(ge)月(yue)，可能(neng)對(dui)於永(yong)生化(hua)細胞株來說(shuo)要(yao)求不是太高，細胞嬌(jiao)弱(ruo)，放置(zhi)時間不(bu)宜過(guo)長(chang)。

開紫外(wai)線(xian)照射臺(tai)的(de)時(shi)候(hou)，就(jiu)將(jiang)培養(yang)基、酶(mei)、DHANKS液那到室(shi)外(wai)讓它自(zi)然升(sheng)溫。這(zhe)樣(yang)40分鐘後，溫度(du)也(ye)升(sheng)上來了(le)。有(you)很(hen)多(duo)人將(jiang)他(ta)放到37度水浴(yu)鍋裏(li)加(jia)熱(re)。壹定要(yao)註(zhu)意(yi)水浴(yu)鍋的(de)衛(wei)生，有的常(chang)年不清(qing)洗(xi)，裏(li)面很(hen)臟(zang)，容(rong)易(yi)在外(wai)面瓶(ping)身上吸(xi)附(fu)大量細菌。因此用它的也壹定要(yao)勤(qin)換(huan)水。從水浴(yu)鍋拿出後，找個毛巾(jin)擦(ca)幹上(shang)面的(de)水。

細胞 停滯(zhi)期（Stagnate phase） 細胞數(shu)量達到(dao)飽(bao)和密(mi)度後，如(ru)不(bu)及(ji)時進(jin)行傳代，細胞就(jiu)會(hui)停止(zhi)增殖(zhi)，進(jin)入(ru)停止(zhi)期(qi)。此時(shi)細胞數(shu)持(chi)平(ping)，故也稱(cheng)平(ping)臺期(qi)（Plateau phase）。停滯(zhi)期細胞雖(sui)不(bu)增殖(zhi)，但仍(reng)有代謝(xie)活(huo)動(dong)。如(ru)不(bu)進(jin)行分離(li)傳代，細胞會(hui)因(yin)培養(yang)液中(zhong)營(ying)養(yang)耗盡(jin)、代謝(xie)產物積(ji)聚、pH 下(xia)降等因(yin)素(su)中(zhong)毒，出現形態(tai)改變(bian)，貼(tie)壁(bi)細胞會(hui)脫(tuo)落，嚴重的(de)會發(fa)生(sheng)死亡，因此，應(ying)及(ji)時傳代。