小鼠P物(wu)質(zhi)ELISA試劑盒​檢(jian)測操(cao)作步(bu)驟

小鼠P物(wu)質(zhi)ELISA試劑盒試劑盒采用雙抗體(ti)壹(yi)步(bu)夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附試驗(yan)(ELISA)。往(wang)預先(xian)包(bao)被抗體(ti)的包(bao)被微孔中,依(yi)次加(jia)入(ru)標(biao)本、標準(zhun)品、HRP標(biao)記的檢(jian)測抗(kang)體(ti),經(jing)過(guo)溫育(yu)並(bing)*洗(xi)滌。用底物TMB顯(xian)色,TMB在過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色,並(bing)在酸的作用(yong)下轉化(hua)成(cheng)最(zui)終(zhong)的黃(huang)色。顏色的深(shen)淺(qian)和樣(yang)品中(zhong)呈正(zheng)相關(guan)。用(yong)酶(mei)標儀在450nm 波長(chang)下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)(OD 值(zhi)),計(ji)算(suan)樣(yang)品濃(nong)度。

小鼠P物(wu)質(zhi)ELISA試劑盒檢(jian)測操(cao)作步(bu)驟:

1.  從(cong)室溫平(ping)衡20min後的鋁(lv)箔袋中取(qu)出所需板(ban)條(tiao),剩余(yu)板(ban)條(tiao)用自(zi)封(feng)袋密(mi)封(feng)放(fang)回(hui)4℃。

2.  設置標(biao)準(zhun)品孔和樣(yang)本孔,標準(zhun)品孔各加(jia)不(bu)同濃(nong)度(du)的標(biao)準(zhun)品50μL;

3.  樣(yang)本孔先加(jia)待(dai)測樣(yang)本10μL,再加(jia)樣(yang)本稀(xi)釋液(ye)40μL;空白(bai)孔不(bu)加(jia)。

4.  除(chu)空白(bai)孔外,標(biao)準(zhun)品孔和樣(yang)本孔中每(mei)孔加(jia)入(ru)辣(la)根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)(HRP)標記的檢(jian)測抗(kang)體(ti)100μL,用(yong)封(feng)板(ban)膜封住反(fan)應孔,37℃水浴鍋(guo)或(huo)恒(heng)溫箱(xiang)溫育(yu)60min。

5.  棄去(qu)液(ye)體(ti),吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹,每孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye),靜(jing)置(zhi)1min,甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye),吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹,如此重復洗(xi)板(ban)5次(也可用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗板(ban))。

6.  每(mei)孔加(jia)入(ru)底物A、B各50μL,37℃避(bi)光孵育(yu)15min。

7.  每孔加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL,15min內(nei),在450nm波長(chang)處測定(ding)各(ge)孔的OD值(zhi)。

8.  準(zhun)確(que)性:標準(zhun)品線性回(hui)歸與預期(qi)濃(nong)度(du)相關(guan)系數(shu)R值(zhi),大於等於0.9900。

9.  靈敏(min)度(du):*檢(jian)測濃(nong)度(du)小於1.0 ng/mL。

10.  特異(yi)性:不(bu)與其它(ta)可溶性結(jie)構(gou)類(lei)似物交叉反(fan)應。

11.  重復性:板(ban)內(nei)、板(ban)間(jian)變異系數(shu)均(jun)小於15%。

12.  貯藏(zang):2-8℃,避(bi)光防(fang)潮保(bao)存。

13.  有效(xiao)期(qi):6個(ge)月(yue)