豬(zhu)血(xue)紅蛋(dan)白(bai)（Hb）檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作步驟

豬(zhu)血(xue)紅蛋(dan)白(bai)（Hb）檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作步驟:

標(biao)準(zhun)品的(de)稀(xi)釋：本試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)供原倍標(biao)準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用戶(hu)可按照(zhao)下(xia)列(lie)圖(tu)表(biao)在小(xiao)試(shi)管(guan)中進(jin)行(xing)稀釋。

加樣(yang)：分別(bie)設(she)空白(bai)孔(kong)（空(kong)白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣(yang)品(pin)及酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)，其(qi)余各(ge)步操(cao)作相(xiang)同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加樣(yang)50μl，待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先加樣(yang)品(pin)稀釋液(ye)40μl，然後再(zai)加待(dai)測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最終(zhong)稀(xi)釋度(du)為5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部，盡量(liang)不(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。

溫(wen)育：用封板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。

配(pei)液(ye)：將30倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用蒸餾水30倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用

洗(xi)滌：小(xiao)心揭掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去液體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒後棄去，如此重復5次，拍(pai)幹。

加酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。

溫(wen)育：用封板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。

洗(xi)滌：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。

顯色(se)：每(mei)孔(kong)先加入顯色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色(se)10分鐘(zhong).

終(zhong)止：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時藍色(se)立(li)轉黃色(se)）。

測(ce)定：以空(kong)白孔(kong)調(tiao)零，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測(ce)量各(ge)孔(kong)的(de)吸光度(du)（OD值）。 測(ce)定應(ying)在加(jia)終(zhong)止液後15分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

計(ji)算

以標(biao)準(zhun)物的(de)濃(nong)度(du)為橫坐標(biao)，OD值為縱(zong)坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，根(gen)據樣(yang)品(pin)的OD值由(you)標(biao)準(zhun)曲線(xian)查出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃度(du)；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數；或(huo)用標(biao)準(zhun)物的(de)濃(nong)度(du)與(yu)OD值計(ji)算出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(xian)的(de)直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方程式，將(jiang)樣(yang)品(pin)的OD值代(dai)入方程式，計(ji)算出(chu)樣(yang)品(pin)濃度(du)，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數，即為樣(yang)品(pin)的實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。