Tetanus Ab elisa酶聯(lian)免疫試(shi)劑盒(he)操作步驟(zhou)

Tetanus Ab elisa酶聯免疫試(shi)劑盒(he)操作步驟(zhou):

1. 標準品的稀(xi)釋(shi)與(yu)加樣：在(zai)酶標包被板(ban)上設標準品孔(kong)10孔(kong)，在di壹、第二孔(kong)中分(fen)別加標準品100μl，然後在(zai)di壹、第二孔(kong)中加標準品稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後從(cong)di壹孔(kong)、第二孔(kong)中各(ge)取100μl分別加到第(di)三孔(kong)和(he)第四(si)孔(kong)，再在第(di)三(san)、第(di)四(si)孔(kong)分別(bie)加標準品稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後在(zai)第(di)三(san)孔(kong)和(he)第四(si)孔(kong)中先(xian)各(ge)取50μl棄(qi)掉(diao)，再各取50μl分別取50μl分別加到第(di)七、第(di)八孔(kong)中，再在第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中分(fen)別加標準品稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從(cong)第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中加到第(di)五、第六(liu)孔(kong)中，再在第(di)五、第六(liu)孔(kong)中分(fen)別加標準品稀釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻(yun)後從(cong)第(di)五、第六(liu)孔(kong)中各(ge)分別取50μl加到第(di)九、第(di)十孔(kong)中，再在第(di)九(jiu)第(di)十孔(kong)分別(bie)加標準品稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從(cong)第(di)九(jiu)第(di)十孔(kong)中各(ge)取50μl棄(qi)掉(diao)。（稀釋(shi)後各(ge)孔(kong)加樣量(liang)都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分(fen)別設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣品(pin)及酶標試(shi)劑，其(qi)余各步(bu)操作相(xiang)同）、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)。在酶(mei)標包被板(ban)上待測(ce)樣(yang)品孔(kong)中先(xian)加樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再加待測(ce)樣(yang)品10μl（樣品最終(zhong)稀釋(shi)度為5倍）。加樣將(jiang)樣品加於酶(mei)標板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍）倍(bei)濃縮洗滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用(yong)。

5. 洗(xi)滌：小心揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩幹，每孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒後棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復5次(ci)，拍幹。

6. 加酶：每(mei)孔(kong)加入酶(mei)標試(shi)劑50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外。

7. 溫育：操(cao)作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯(xian)色(se)：每孔(kong)先(xian)加入顯(xian)色(se)劑A50μl，再加入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分鐘(zhong).

10. 終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加終止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此(ci)時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。

11. 測(ce)定(ding)：以空白(bai)空調(tiao)零，450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各孔(kong)的吸(xi)光度（OD值）。 測(ce)定(ding)應在(zai)加終止(zhi)液(ye)後15分(fen)鐘(zhong)。

 多(duo)黏(nian)類(lei)芽(ya)孢桿(gan)菌(jun)

 蘑菇假(jia)單胞(bao)菌(jun)

 產(chan)堿假(jia)單胞(bao)菌(jun)

 橙(cheng)色(se)粘(zhan)球菌(jun)

 黃色(se)粘(zhan)球菌(jun)

 弱(ruo)小珊瑚(hu)桿菌(jun)

 葉柄粘(zhan)球菌(jun)

 侵(qin)蝕侏儒(ru)囊菌(jun)

 變(bian)綠(lv)粘(zhan)球菌(jun)

 紫色(se)孢囊(nang)桿(gan)菌

 孢囊(nang)桿(gan)菌

 匣(xia)狀(zhuang)粘(zhan)球菌(jun)

 過(guo)渡(du)原(yuan)囊(nang)菌(jun)

 丁(ding)酸梭(suo)菌

 鮑曼(man)不(bu)動(dong)桿菌(jun)

 類(lei)幹酪(lao)乳桿(gan)菌(jun)

 植(zhi)物乳(ru)桿(gan)菌(jun)(胚芽(ya)乳(ru)桿菌)

 短(duan)乳(ru)桿(gan)菌(jun)

 凝結(jie)芽(ya)孢桿(gan)菌(jun)

 居海(hai)洛克氏(shi)菌(jun)

 香港洛(luo)克(ke)氏(shi)菌(jun)

 海(hai)洋(yang)海棲(qi)菌

 威尼斯(si)不(bu)動(dong)桿菌(jun)

 地(di)衣芽孢桿(gan)菌(jun)

 羅伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)

 惰性解油(you)螺旋(xuan)菌(jun)

 糞(fen)腸(chang)球菌(jun)(糞(fen)鏈(lian)球菌(jun))

 大(da)腸(chang)埃(ai)希(xi)氏(shi)菌(jun)(大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun))

 越南伯(bo)克霍(huo)爾德(de)氏(shi)菌(jun)

 西(xi)伯(bo)利(li)亞庫(ku)特氏(shi)菌(jun)