小(xiao)鼠神經(jing)生長因(yin)子(NGF)ELISA免費代(dai)測試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟(zhou)

小(xiao)鼠神經(jing)生長因(yin)子(NGF)ELISA免費代(dai)測試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟(zhou)

1. 標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)稀(xi)釋與加樣：在酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上設標準(zhun)品(pin)孔10孔(kong)，在di壹(yi)、第二孔中(zhong)分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)100μl，然後在di壹(yi)、第二孔中(zhong)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液50μl，混勻；然後從di壹(yi)孔、第(di)二孔中(zhong)各(ge)取(qu)100μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第三(san)孔和(he)第四(si)孔(kong)，再在第(di)三(san)、第四(si)孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液50μl，混勻；然後在第三(san)孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)中(zhong)先(xian)各(ge)取(qu)50μl棄(qi)掉，再各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第七(qi)、第八(ba)孔中(zhong)，再在第(di)七(qi)、第八(ba)孔中(zhong)分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液50μl，混勻後從第七、第八(ba)孔中(zhong)加(jia)到(dao)第五(wu)、第六孔(kong)中(zhong)，再在第(di)五(wu)、第六孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液50ul，混勻；混(hun)勻後從第五、第六孔(kong)中(zhong)各(ge)分(fen)別(bie)取(qu)50μl加(jia)到(dao)第九、第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)，再在第(di)九第(di)十(shi)孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液50μl，混勻後從第九第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)50μl棄(qi)掉。（稀釋(shi)後各(ge)孔(kong)加樣量都(dou)為50μl，濃度(du)分(fen)別(bie)為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加(jia)樣：分(fen)別(bie)設空白孔（空白對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試劑(ji)，其(qi)余(yu)各(ge)步操作(zuo)相(xiang)同(tong)）、待測樣品(pin)孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上待(dai)測樣品(pin)孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液40μl，然後再加待(dai)測樣品(pin)10μl（樣品(pin)最終(zhong)稀釋度(du)為(wei)5倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣品(pin)加於(yu)酶標(biao)板(ban)孔底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及孔壁，輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻。

3. 溫(wen)育：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。

4. 配液：將(jiang)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用蒸餾水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用。

5. 洗滌(di)：小(xiao)心揭(jie)掉封板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹，每孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒後棄(qi)去(qu)，如(ru)此重復5次(ci)，拍幹。

6. 加酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶標(biao)試劑(ji)50μl，空白孔除(chu)外(wai)。

7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。

8. 洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同5。

9. 顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加入(ru)顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光顯(xian)色15分(fen)鐘(zhong).

10. 終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此(ci)時藍(lan)色立轉(zhuan)黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波(bo)長依序測量各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)）。 測定應(ying)在(zai)加終止(zhi)液後15分鐘。