小(xiao)鼠羧(suo)化(hua)不全(quan)骨(gu)鈣素(su)（ucOC）ELISA試劑盒​操作(zuo)步驟

小(xiao)鼠羧(suo)化(hua)不全(quan)骨(gu)鈣素(su)（ucOC）ELISA試劑盒操作(zuo)步驟

1. 標準品的稀(xi)釋與加樣：在酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)設(she)標準品孔(kong)10孔，在di壹(yi)、第(di)二孔(kong)中分別加標準品100μl，然(ran)後(hou)在di壹(yi)、第(di)二孔(kong)中加標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後(hou)從(cong)di壹(yi)孔(kong)、第二孔(kong)中各取100μl分別(bie)加到第三孔和(he)第(di)四(si)孔(kong)，再在第(di)三(san)、第四(si)孔(kong)分別(bie)加標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後(hou)在第(di)三(san)孔和(he)第四(si)孔(kong)中先(xian)各(ge)取50μl棄(qi)掉，再各(ge)取50μl分別(bie)取(qu)50μl分(fen)別加到第七、第八(ba)孔(kong)中(zhong)，再在第(di)七(qi)、第八(ba)孔中分別(bie)加標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七(qi)、第八孔(kong)中加到第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)，再在第(di)五(wu)、第六(liu)孔中分別(bie)加標準品稀(xi)釋液50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)五(wu)、第六孔(kong)中各分別取(qu)50μl加到第九、第十(shi)孔中(zhong)，再在第(di)九(jiu)第十(shi)孔分(fen)別加標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九(jiu)第十(shi)孔中(zhong)各取50μl棄掉。（稀釋後(hou)各孔加樣量(liang)都(dou)為(wei)50μl，濃度(du)分別(bie)為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(she)空白(bai)孔（空白(bai)對照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣品及酶標試劑，其余各(ge)步操作(zuo)相(xiang)同(tong)）、待(dai)測(ce)樣品孔。在酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)待(dai)測(ce)樣品孔中先(xian)加樣品稀釋液40μl，然後(hou)再加待測樣品10μl（樣品最(zui)終(zhong)稀釋度(du)為(wei)5倍(bei)）。加樣將(jiang)樣品加於(yu)酶(mei)標板(ban)孔(kong)底部，盡量(liang)不(bu)觸及孔(kong)壁，輕輕(qing)晃動混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用封板(ban)膜封板(ban)後(hou)置37℃溫育30分鐘。

4. 配(pei)液：將(jiang)30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液用(yong)蒸(zheng)餾水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備用。

5. 洗(xi)滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加滿洗滌(di)液，靜(jing)置30秒後(hou)棄去，如此(ci)重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍幹(gan)。

6. 加酶：每孔(kong)加入(ru)酶(mei)標試劑50μl，空白(bai)孔除外。

7. 溫(wen)育：操作(zuo)同(tong)3。

8. 洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同(tong)5。

9. 顯(xian)色(se)：每孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑A50μl，再加入(ru)顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避光顯(xian)色(se)15分鐘.

10. 終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色立(li)轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。

11. 測(ce)定(ding)：以空白(bai)空調零(ling)，450nm波(bo)長依(yi)序測量(liang)各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）。 測(ce)定(ding)應(ying)在加終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)15分鐘。