微生(sheng)物(wu)超氧化物(wu)歧化(hua)酶(SOD)ELISA試(shi)劑盒間接(jie)法

微生(sheng)物(wu)超氧化物(wu)歧化(hua)酶(SOD)ELISA試(shi)劑盒間接(jie)法(檢測未知(zhi)抗體(ti))

1、用(yong)包(bao)被緩(huan)沖液將(jiang)已(yi)知(zhi)抗原(yuan)稀釋至(zhi)1-10ug/ml， 每(mei)孔(kong)加(jia)0.1ml，4℃過夜(ye)。次(ci)日洗(xi)滌(di)3次(ci)。

2、加(jia)樣(yang)：加(jia)壹定(ding)稀釋的(de)待檢樣(yang)品(pin)(未知(zhi)抗體(ti))0.05ml於上述(shu)已(yi)包(bao)被之反應孔(kong)中(zhong),置(zhi)37℃孵育1小時,洗(xi)滌(di)。(同時做空白(bai)、陰(yin)性及陽性孔對(dui)照(zhao))

3、加(jia)酶標抗體(ti)：於反應孔(kong)中(zhong)，加(jia)入新鮮稀(xi)釋的(de)酶(mei)標第(di)二抗體(ti)(抗抗體(ti))0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗(xi)滌(di),最後壹遍用(yong)DDW洗(xi)滌(di)。

4、加(jia)底物(wu)液顯色：於各反應孔(kong)中(zhong)加(jia)入臨時配(pei)制(zhi)的(de)TMB底物(wu)溶液0.1ml，37℃ 10～30分(fen)鐘。

5、終(zhong)止(zhi)反(fan)應：於各反應孔(kong)中(zhong)加(jia)入2M硫(liu)酸(suan)0.05ml

6、結果(guo)判定(ding)：可於白(bai)色背(bei)景(jing)上，直接(jie)用(yong)肉(rou)眼觀察(cha)結(jie)果(guo)：反應(ying)孔(kong)內(nei)顏(yan)色越(yue)深(shen)，陽性程(cheng)度(du)越強(qiang)，陰(yin)性反(fan)應(ying)為(wei)無色或(huo)極(ji)淺(qian)，依(yi)據(ju)所(suo)呈顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)，以(yi)“+"、“-"號表示(shi)。也可測OD值：在(zai)ELISA檢測儀(yi)上，於450nm(若以(yi)ABTS顯色，則410nm)處，以(yi)空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)調零(ling)後測各孔OD值，若(ruo)大於規定(ding)的(de)陰(yin)性對(dui)照(zhao)OD值(zhi)的(de)2.1倍(bei)，即為(wei)陽性(xing)。

ELISA試(shi)劑盒的(de)儲(chu)存及有效(xiao)期         

1. 未開(kai)封的(de)試(shi)劑盒：所(suo)有試(shi)劑均(jun)按(an)試(shi)劑瓶(ping)標簽(qian)上所(suo)示(shi)保存(cun)。請(qing)註意(yi)，收到試(shi)劑盒後請(qing)盡快(kuai)將TMB 洗(xi)滌(di)液，終(zhong)止(zhi)液保存(cun)於4℃，其他(ta)試(shi)劑保存(cun)於-20℃。

2. 使用(yong)後的(de)試(shi)劑盒：剩余試(shi)劑仍需按(an)照(zhao)試(shi)劑瓶(ping)標簽(qian)所(suo)示(shi)的(de)溫(wen)度保存(cun)，開(kai)封後的(de)酶(mei)標板(ban)要(yao)加(jia)幹燥劑後密封保存(cun)於-20℃，避免潮(chao)濕。

註(zhu)意(yi)：

試(shi)劑盒內(nei)酶(mei)標條可拆(chai)卸(xie)，按(an)實(shi)驗(yan)需求(qiu)可分多(duo)次(ci)使(shi)用(yong)；使(shi)用(yong)後的(de)剩(sheng)余試(shi)劑盒建(jian)議在(zai)實(shi)驗(yan)後1個月(yue)內(nei)使(shi)用(yong)完畢。產(chan)品(pin)過期(qi)時間以(yi)盒(he)子上的(de)標(biao)簽為(wei)準(zhun)，保質(zhi)期(qi)內(nei)所(suo)有組(zu)分(fen)都(dou)確(que)保是(shi)穩(wen)定(ding)的(de)。