大(da)鼠腦(nao)腸肽(tai)（BGP/Gehrelin）ELISA試劑盒操(cao)作步驟(zhou)

大鼠腦腸肽(tai)（BGP/Gehrelin）ELISA試劑盒操(cao)作步驟(zhou)

1. 標準品(pin)的(de)稀釋(shi)與加樣：在(zai)酶(mei)標包被(bei)板(ban)上設標準品(pin)孔10孔(kong)，在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔中分別加(jia)標準品(pin)100μl，然(ran)後在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔中加標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後從(cong)di壹(yi)孔、第(di)二孔中各取100μl分別加(jia)到第(di)三(san)孔和第四(si)孔，再在(zai)第(di)三(san)、第四(si)孔分別加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後在(zai)第(di)三(san)孔和第四(si)孔中(zhong)先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加(jia)到第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中，再在(zai)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中分別加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從(cong)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中加到第(di)五、第(di)六(liu)孔中(zhong)，再在(zai)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔中(zhong)分別加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混勻(yun)後從(cong)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔中(zhong)各分別取50μl加到第(di)九、第十孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第(di)九第十孔(kong)分別加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從(cong)第(di)九第十孔(kong)中(zhong)各取50μl棄掉。（稀(xi)釋後各孔加(jia)樣量(liang)都(dou)為(wei)50μl，濃度(du)分別為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣(yang)：分別設空白(bai)孔（空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品及(ji)酶標試劑，其(qi)余(yu)各步操(cao)作相(xiang)同(tong)）、待測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標包被(bei)板(ban)上待測樣(yang)品(pin)孔中先加樣(yang)品(pin)稀釋液(ye)40μl，然(ran)後再加待測樣(yang)品(pin)10μl（樣品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍(bei)）。加樣將樣(yang)品(pin)加於酶(mei)標板(ban)孔底(di)部(bu)，盡量(liang)不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫育(yu)：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)後置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘。

4. 配液：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋後備(bei)用(yong)。

5. 洗滌(di)：小心揭掉封板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩幹(gan)，每(mei)孔加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒後棄(qi)去(qu)，如此重復(fu)5次，拍(pai)幹。

6. 加酶(mei)：每(mei)孔加入酶(mei)標試劑50μl，空白(bai)孔除(chu)外。

7. 溫育(yu)：操(cao)作同(tong)3。

8. 洗滌(di)：操(cao)作同(tong)5。

9. 顯(xian)色：每(mei)孔先加入顯(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色15分鐘.

10. 終(zhong)止：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此時藍(lan)色(se)立轉黃色）。

11. 測定(ding)：以(yi)空白(bai)空調零，450nm波(bo)長(chang)依序測量(liang)各孔的(de)吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止液後15分鐘。