UACC812細胞(bao)人(ren)乳腺導(dao)管瘤細胞(bao)細胞(bao)​培養操作過程

UACC812細胞(bao)人(ren)乳腺導(dao)管瘤細胞(bao)細胞(bao)培養操作過程：

註意無菌(jun)。無論哪(na)壹管液體(ti)，開(kai)蓋(gai)後盡量立(li)即關上（如果有(you)幾(ji)瓶都(dou)需(xu)要(yao)開的，也註意，可(ke)以虛(xu)蓋(gai)）。蓋(gai)子向上放。操作時(shi)不要(yao)從(cong)開(kai)蓋(gai)的容(rong)器上方經(jing)過。另(ling)外，無菌(jun)臺(tai)面上擺(bai)放的各種東(dong)西(xi)，*是(shi)壹字擺開(kai)，平行於(yu)自己(ji)。盡量不要(yao)前後(hou)重疊(die)。

UACC812細胞(bao)人(ren)乳腺導(dao)管瘤細胞(bao)細胞(bao)操作中所(suo)用的所(suo)有(you)耗(hao)材試(shi)劑(ji)*都(dou)是(shi)細胞(bao)培養。壹般都以壹次(ci)性(xing)耗(hao)材居(ju)多。1ML槍(qiang)頭(tou)為加(jia)長(chang)型培養槍(qiang)頭(tou)。移液管亦有(you)10mL壹次(ci)性(xing)無菌(jun)移液管

（1）細胞(bao)換液：

培養皿(min)/瓶用(yong)槍頭(tou)或移液管吸去(qu)原(yuan)培養液(ye)，加(jia)入(ru)新(xin)培養液(ye)。

（2）細胞(bao)傳代：

傳代之(zhi)前(qian)先觀(guan)察，細胞(bao)是(shi)否(fou)密集，是(shi)否(fou)開(kai)始融合(he)。壹般融合(he)達到70－80%就可(ke)以(yi)傳代(dai)。早點傳(chuan)代(dai)也可以(yi)。

如果是(shi)貼(tie)壁生長(chang)的細胞(bao)：

1） 培養皿(min)/瓶用(yong)槍頭(tou)或移液管吸去(qu)原(yuan)培養液(ye)；

2） 無菌(jun)PBS或無菌(jun)生理(li)鹽水(shui)洗(xi)滌(di)3次(ci)（按培養體(ti)積(ji)加(jia)入(ru)）；

3） 加(jia)入(ru)適量(liang)消(xiao)化適當(dang)時(shi)間（壹般為0.25%；9cm/10cm培養皿(min)和25cm培養瓶，壹次(ci)加(jia)入(ru)1mL。消(xiao)化時(shi)間視細胞(bao)類(lei)型等(deng)多種(zhong)情況(kuang)綜(zong)合考(kao)慮，壹般如果是(shi)細胞(bao)株，非原(yuan)代培養，消(xiao)化1－2分鐘足矣）；

4） 用(yong)槍(qiang)頭(tou)吹打數(shu)十(shi)次(ci)（視細胞(bao)類(lei)型而(er)定。壹般細胞(bao)株30－50次(ci)吧(ba)，耗(hao)時(shi)壹般2分鐘左(zuo)右(you)）；

5） 加(jia)入(ru)適量(liang)體(ti)積培養基(ji)終止消(xiao)化（如果是(shi)9cm/10cm培養皿(min)和25cm培養瓶，可(ke)以加(jia)入(ru)1mL培養基(ji)；現在(zai)培養瓶（皿(min)）裏有(you)2mL溶(rong)液(ye)）。

6） 現(xian)在(zai)可(ke)以將溶(rong)液(ye)進(jin)行分瓶（2mL）。如果是(shi)細胞(bao)株，直接均(jun)分到兩個(ge)培養瓶（皿(min)）裏。如果是(shi)原(yuan)代培養，可(ke)以(yi)根(gen)據消(xiao)化時(shi)間來(lai)對細胞(bao)進行分離(li)；因(yin)此可以將溶(rong)液(ye)（2mL）都(dou)轉(zhuan)入新(xin)的培養瓶（皿(min)）。

7） 將兩個(ge)培養瓶（皿(min)）補足培養基(ji)到正常體積(ji)（果(guo)是(shi)9cm/10cm培養皿(min)和25cm培養瓶，為5mL培養液(ye)）

8） 鏡(jing)下觀(guan)察。剛(gang)剛(gang)傳代(dai)細胞(bao)還沒貼(tie)壁，懸浮在(zai)溶(rong)液(ye)中，呈(cheng)圓形(xing)。壹般2h之(zhi)內(nei)會(hui)貼(tie)壁，如果已經(jing)貼(tie)壁，根(gen)據細胞(bao)類(lei)型有(you)不(bu)同(tong)的形(xing)態(tai)，但(dan)通常都不(bu)是(shi)圓形(xing)。

9） 鏡下(xia)觀(guan)察無誤之(zhi)後(hou)，再放入細胞(bao)培養箱(xiang)。培養瓶（皿(min)）放入之(zhi)前(qian)，可以用(yong)消(xiao)毒(du)酒(jiu)精(jing)先(xian)擦壹下。

10） 傳(chuan)代(dai)之(zhi)後(hou)，*第二天(tian)細胞(bao)換液壹次(ci)。當(dang)然(ran)，也可(ke)以視情況(kuang)而(er)定。

7、 收(shou)拾工作(zuo)臺(tai)。物品(pin)歸(gui)位(wei)，倒出(chu)垃(la)圾(ji)。再開紫外照(zhao)射(she)30min