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小鼠胰島素(su)受(shou)體β(ISR-β)檢測試劑(ji)盒(he)樣本處理及要(yao)求(qiu):
1. 血清:室溫(wen)血液(ye)自然凝固10-20分(fen)鐘,離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清,保存(cun)過(guo)程(cheng)中(zhong)如(ru)出(chu)現沈(chen)澱,應(ying)再次(ci)離心。
2. 血漿(jiang):應(ying)根(gen)據標本的(de)要(yao)求(qiu)選擇(ze)EDTA或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉作為(wei)抗(kang)凝劑(ji),混合(he)10-20分(fen)鐘後(hou),離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清,保存(cun)過(guo)程(cheng)中(zhong)如(ru)有沈(chen)澱形(xing)成,應該(gai)再(zai)次(ci)離心。
3. 尿(niao)液(ye):用(yong)無菌(jun)管收(shou)集,離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清,保存(cun)過(guo)程(cheng)中(zhong)如(ru)有沈(chen)澱形(xing)成,應再(zai)次(ci)離心。胸腹水(shui)、腦(nao)脊液(ye)參(can)照(zhao)實行(xing)。
4. 細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上清:檢測分(fen)泌(mi)性(xing)的(de)成份(fen)時(shi),用無菌(jun)管收(shou)集。離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清。檢測細(xi)胞(bao)內的(de)成份(fen)時(shi),用PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋(shi)細(xi)胞(bao)懸液(ye),細(xi)胞(bao)濃度達到
100萬/ml左(zuo)右(you)。通(tong)過反(fan)復凍融,以(yi)使細(xi)胞(bao)破壞並(bing)放出(chu)細(xi)胞(bao)內成份(fen)。離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清。保存(cun)過(guo)程(cheng)中(zhong)如(ru)有沈(chen)澱形(xing)成,應再(zai)次(ci)離心。
5. 組(zu)織標本:切割標本後(hou),稱(cheng)取(qu)重量。加(jia)入(ru)壹(yi)定量的(de)PBS,PH7.4。用(yong)液(ye)氮迅速冷凍保存(cun)備用(yong)。標本融化後(hou)仍然保持(chi)2-8℃的(de)溫(wen)度。加(jia)入(ru)壹(yi)定量的(de)PBS(PH7.4),用(yong)手工(gong)或勻(yun)漿(jiang)器(qi)將(jiang)標本勻漿充分(fen)。離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清。分(fen)裝(zhuang)後(hou)壹(yi)份(fen)待(dai)檢測,其(qi)余冷凍備用(yong)。
6. 標本采(cai)集後(hou)盡早進行(xing)提取(qu),提取(qu)按相(xiang)關(guan)文獻進行(xing),提取(qu)後(hou)應(ying)盡快進行(xing)實驗。若(ruo)不(bu)能馬上進行(xing)試驗,可(ke)將(jiang)標本放於(yu)-20℃保存(cun),但應(ying)避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong).
7. 不(bu)能檢(jian)測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin),因NaN3抑制辣(la)根過(guo)氧化物(wu)酶的(de)(HRP)活(huo)性(xing)。
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