小鼠性激(ji)素(su)結合球(qiu)蛋(dan)白(bai)（SHBG）酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分析(xi)試(shi)劑(ji)盒(he)​操(cao)作(zuo)步驟

小鼠性激(ji)素(su)結合球(qiu)蛋(dan)白(bai)（SHBG）酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分析(xi)試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)步驟:

1. 標(biao)準品(pin)的(de)稀釋與(yu)加(jia)樣(yang)：在(zai)酶標包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)設(she)標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)10孔(kong)，在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)分別加標準(zhun)品(pin)100μl，然(ran)後(hou)在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)加標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液50μl，混勻(yun)；然後(hou)從di壹(yi)孔(kong)、第(di)二孔(kong)中(zhong)各取100μl分別加到第(di)三(san)孔(kong)和(he)第四孔(kong)，再(zai)在(zai)第三(san)、第(di)四孔(kong)分別加標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混勻(yun)；然後(hou)在(zai)第三(san)孔(kong)和(he)第四孔(kong)中(zhong)先(xian)各取50μl棄掉(diao)，再(zai)各取50μl分別取50μl分別加到第(di)七、第(di)八孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第七、第(di)八孔(kong)中(zhong)分別加標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混勻(yun)後(hou)從第(di)七、第(di)八孔(kong)中(zhong)加到(dao)第五、第六孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第五、第(di)六孔(kong)中(zhong)分別加標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50ul，混勻(yun)；混勻後(hou)從第(di)五、第六孔(kong)中(zhong)各分別取50μl加(jia)到(dao)第九(jiu)、第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)分別加標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混勻(yun)後(hou)從第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)各取50μl棄掉(diao)。（稀(xi)釋後(hou)各孔(kong)加(jia)樣(yang)量都(dou)為50μl，濃(nong)度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣(yang)：分別設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其余各步(bu)操作(zuo)相同）、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液40μl，然後(hou)再(zai)加待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最終(zhong)稀(xi)釋度為(wei)5倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標板(ban)孔(kong)底(di)部，盡量不觸(chu)及(ji)孔(kong)壁，輕輕(qing)晃動混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後(hou)置37℃溫(wen)育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗滌液用蒸(zheng)餾水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋後(hou)備(bei)用。

5. 洗滌：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄去(qu)液體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄去(qu)，如此重(zhong)復5次，拍幹。

6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外(wai)。

7. 溫(wen)育：操作(zuo)同3。

8. 洗滌：操作(zuo)同5。

9. 顯色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)15分鐘.

10. 終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應（此時藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。

11. 測(ce)定(ding)：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm波長依序測(ce)量各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加終止(zhi)液後(hou)15分鐘。