小(xiao)鼠(shu)水通道蛋白0（AQP-0）ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)​操(cao)作步(bu)驟(zhou)

　　小鼠(shu)水通道蛋白0（AQP-0）ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作步(bu)驟(zhou):

1. 標準(zhun)品的(de)稀(xi)釋(shi)與加樣：在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)設標準(zhun)品孔(kong)10孔(kong)，在di壹、第(di)二孔(kong)中(zhong)分別(bie)加標準(zhun)品100μl，然(ran)後在di壹、第(di)二孔(kong)中(zhong)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)；然(ran)後從(cong)di壹(yi)孔(kong)、第(di)二孔(kong)中(zhong)各取(qu)100μl分別(bie)加到(dao)第(di)三孔(kong)和(he)第(di)四(si)孔(kong)，再在第(di)三、第(di)四(si)孔(kong)分別(bie)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)；然(ran)後在第(di)三孔(kong)和(he)第(di)四(si)孔(kong)中(zhong)先各取(qu)50μl棄(qi)掉，再各取(qu)50μl分別(bie)取50μl分別(bie)加到(dao)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中(zhong)，再在第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)後從(cong)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中(zhong)加到(dao)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)，再在第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液50ul，混勻(yun)；混勻(yun)後從(cong)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)各分別(bie)取50μl加到(dao)第(di)九(jiu)、第(di)十孔(kong)中(zhong)，再在第(di)九(jiu)第(di)十孔(kong)分別(bie)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻(yun)後從(cong)第(di)九(jiu)第(di)十孔(kong)中(zhong)各取(qu)50μl棄(qi)掉。(稀(xi)釋(shi)後各孔(kong)加樣量(liang)都為(wei)50μl，濃(nong)度分別(bie)為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L)。
 

　　2. 加樣：分別(bie)設空白孔(kong)(空(kong)白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣品及(ji)酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其余各步(bu)操(cao)作相(xiang)同(tong))、待(dai)測樣品孔(kong)。在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)待測樣品孔(kong)中(zhong)先加樣品稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)後再加待測樣品10μl(樣(yang)品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍(bei))。加樣將(jiang)樣品加於酶(mei)標板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻(yun)。
 

　　3. 溫育(yu)：用封板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘。
 

　　4. 配(pei)液：將30(48T的(de)20倍(bei))倍(bei)濃縮洗滌(di)液用蒸餾(liu)水30(48T的(de)20倍(bei))倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用(yong)。
 

　　5. 洗滌(di)：小心揭掉(diao)封板(ban)膜(mo)，棄(qi)去液體，甩幹，每孔(kong)加滿洗滌(di)液，靜置(zhi)30秒後(hou)棄(qi)去，如(ru)此(ci)重復(fu)5次，拍幹。
 

　　6. 加酶(mei)：每孔(kong)加入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外。
 

　　7. 溫育：操(cao)作同(tong)3。
 

　　8. 洗滌(di)：操(cao)作同(tong)5。
 

　　9. 顯(xian)色：每孔(kong)先(xian)加入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色15分鐘.
 

　　10. 終止：每孔(kong)加終止液50μl，終止反應(此時(shi)藍色立轉(zhuan)黃色)。
 

　　11. 測定(ding)：以空(kong)白空調零，450nm波長(chang)依(yi)序測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光度(du)(OD值)。 測定(ding)應在加終止液後15分鐘。