人(ren)β2糖(tang)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體IgG（β2-GP1 Ab IgG）酶聯免疫(yi)分析試劑盒(he)​操作步(bu)驟(zhou)

人β2糖(tang)蛋白(bai)1抗(kang)體IgG（β2-GP1 Ab IgG）酶聯免疫(yi)分析試劑盒(he)操作步(bu)驟(zhou)：

1. 標(biao)準(zhun)品(pin)的稀(xi)釋(shi)與(yu)加樣：在(zai)酶(mei)標包被(bei)板(ban)上(shang)設標(biao)準(zhun)品(pin)孔10孔，在(zai)di壹、第二(er)孔中分別加標準(zhun)品(pin)100μl，然(ran)後在(zai)di壹、第二(er)孔中加標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後從(cong)di壹孔、第二(er)孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在(zai)第(di)三、第(di)四孔分別加標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後在(zai)第(di)三孔和第四孔中先各取50μl棄掉(diao)，再(zai)各取50μl分別取50μl分別加到第七、第(di)八孔中，再在(zai)第(di)七、第(di)八孔中分別加標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從(cong)第七(qi)、第八孔中加到第五、第(di)六孔中，再在(zai)第(di)五、第(di)六孔中分別加標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混勻(yun)後從(cong)第五(wu)、第六孔中各分別取50μl加到第九、第(di)十(shi)孔中，再在(zai)第(di)九第(di)十孔分別加標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從(cong)第九(jiu)第十(shi)孔中各取50μl棄掉(diao)。（稀(xi)釋(shi)後各孔加樣量(liang)都為50μl，濃度(du)分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設空白(bai)孔（空白(bai)對(dui)照(zhao)孔不加樣品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其余各步(bu)操作相(xiang)同）、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標包被(bei)板(ban)上(shang)待(dai)測樣(yang)品(pin)孔中先加樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再(zai)加待(dai)測樣(yang)品(pin)10μl（樣品(pin)最終稀釋(shi)度(du)為5倍）。加樣將樣品(pin)加於酶標板(ban)孔底部，盡(jin)量(liang)不觸(chu)及(ji)孔壁(bi)，輕輕晃(huang)動混(hun)勻(yun)。

3. 溫育：用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後置37℃溫育30分鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍）倍濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水30（48T的20倍）倍稀釋(shi)後備(bei)用(yong)。

5. 洗滌(di)：小(xiao)心揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置30秒後棄(qi)去，如(ru)此重復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白(bai)孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌(di)：操作同5。

9. 顯色(se)：每(mei)孔先加入顯色(se)劑A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光顯色(se)15分(fen)鐘.

10. 終止：每(mei)孔加終止液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立轉黃色(se)）。

11. 測(ce)定：以(yi)空白(bai)空調零(ling)，450nm波(bo)長依序(xu)測(ce)量(liang)各孔的吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）。 測定應在(zai)加終止液後15分(fen)鐘。