人皮(pi)膚MatchPair:皮膚和腫(zhong)瘤組(zu)織(zhi)提(ti)取物培養操作(zuo)要點(dian)

人(ren)皮膚(fu)MatchPair:皮(pi)膚和腫(zhong)瘤組(zu)織(zhi)提(ti)取物培養操作(zuo)要點(dian)；

1）將培養基在37℃水(shui)浴(yu)鍋預熱(re)；準備壹個(ge)15mL無(wu)菌(jun)的(de)離(li)心管(guan)，加(jia)入8mL預熱(re)培養基。

2）將凍存(cun)細胞從液(ye)氮罐(guan)中取出，快(kuai)速(su)放(fang)入37℃水(shui)浴鍋中復(fu)溫（可(ke)準備壹潔(jie)凈(jing)的燒杯，裝(zhuang)滿(man)37℃的(de)水，細胞凍存(cun)管(guan)取(qu)出後(hou)迅(xun)速(su)放(fang)入燒(shao)杯內，再(zai)逐(zhu)步轉(zhuan)移到水浴(yu)鍋中）。輕輕晃動(dong)凍存(cun)管(guan)，使細胞能(neng)在1~2min內(nei)*解凍，使細胞能(neng)盡(jin)快(kuai)通過易受損的溫(wen)度段(duan)（-5~0℃）。註意(yi)凍存(cun)管(guan)管(guan)口(kou)不(bu)能(neng)沒入水(shui)中，BRL(大鼠肝細胞)避(bi)免(mian)引(yin)起(qi)汙(wu)染。

3）用75%酒(jiu)精(jing)擦拭凍存(cun)管(guan)後(hou)再(zai)置(zhi)於超(chao)凈(jing)臺內(nei)，將管(guan)內(nei)細胞轉(zhuan)移至(zhi)準備好(hao)的(de)離(li)心管(guan)內(nei)，輕輕吹打液(ye)體，使細胞均(jun)勻分散，降(jiang)低DMSO濃度，吹打時避免(mian)產(chan)生(sheng)氣泡(pao)。用新鮮培養基洗管(guan)壁(bi)2次，均(jun)轉(zhuan)移至(zhi)離(li)心管(guan)內(nei)。

4）800rpm離(li)心5min，棄上(shang)清(qing)，加(jia)入新(xin)鮮的培養基，吹打制成細胞懸(xuan)液(ye)。

5）將細胞懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi)T25細胞瓶(ping)內(nei)，補加(jia)適量的(de)培養基，輕輕(qing)晃動(dong)細胞瓶(ping)使細胞分(fen)布(bu)均(jun)勻，放入溫(wen)箱內(nei)培養。

6）第二(er)天觀察(cha)細胞貼(tie)壁(bi)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)，換新(xin)鮮培養基以(yi)去(qu)除死細胞。繼(ji)續(xu)培養，待細胞長(chang)至(zhi)80~90%匯(hui)合(he)時(shi)正(zheng)常傳代(dai)。壹般(ban)剛復(fu)蘇的細胞需(xu)經過2~3次傳代(dai)，細胞活(huo)力(li)恢(hui)復(fu)後(hou)才(cai)能(neng)進(jin)行後(hou)續(xu)的實驗(yan)。

服(fu)務(wu)流(liu)程(cheng): 

(1)客(ke)戶提(ti)供:目(mu)的細胞具(ju)體信息;

(2)操作過程(cheng):細胞復(fu)蘇培養,細胞發貨;

(3)交(jiao)付(fu)內(nei)容:細胞系(xi)/細胞株(zhu),以(yi)及(ji)細胞使用說明(ming)書(shu)。