小(xiao)鼠(shu)氧化低密(mi)度脂(zhi)蛋白抗體（OLAb）酶聯免(mian)疫分(fen)析(xi)試劑(ji)盒(he)​雙抗體夾(jia)心(xin)法(fa)

小(xiao)鼠(shu)氧化低密(mi)度脂(zhi)蛋白抗體（OLAb）酶聯免(mian)疫分(fen)析(xi)試劑(ji)盒(he)雙抗體夾(jia)心(xin)法(fa)(檢(jian)測(ce)未(wei)知(zhi)抗原(yuan)):1、用(yong)緩沖液將抗體稀釋(shi)至1-10ug/ml。在反(fan)應(ying)孔(kong)中加(jia)0.1ml，4℃ 過(guo)夜。次日(ri)，棄去孔內溶液(ye)，用(yong)洗滌(di)緩沖液洗3次。

2、加樣(yang)：加壹(yi)定稀釋(shi)的待檢(jian)樣(yang)品(pin)0.05ml於(yu)上述(shu)已包(bao)被之(zhi)反(fan)應(ying)孔(kong)中，置(zhi)37℃ 孵(fu)育1小(xiao)時(shi)。然後洗滌(di)(同(tong)時做(zuo)空白孔，陰(yin)性(xing)對(dui)照孔及陽性(xing)對(dui)照孔)。

3、加酶標(biao)抗體：於(yu)各反(fan)應(ying)孔(kong)中，加(jia)入(ru)新(xin)鮮稀釋(shi)的酶標(biao)抗體(經滴定後的稀(xi)釋(shi)度)0.05ml。37℃ 孵(fu)育0.5～1小(xiao)時(shi)，洗滌(di)。

4、加底(di)物(wu)液顯(xian)色(se)：於(yu)各反(fan)應(ying)孔(kong)中加(jia)入(ru)臨時(shi)配制的TMB底(di)物(wu)溶液(ye)0.1ml，37℃ 10～30分(fen)鐘(zhong)。

5、終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)：於(yu)各反(fan)應(ying)孔(kong)中加(jia)入(ru)2M硫(liu)酸(suan)0.05ml

6、結(jie)果(guo)判(pan)定：可於(yu)白色(se)背景上，直(zhi)接(jie)用(yong)肉(rou)眼觀(guan)察結(jie)果(guo)：反(fan)應(ying)孔(kong)內顏色(se)越深(shen)，陽(yang)性(xing)程(cheng)度(du)越強(qiang)，陰(yin)性(xing)反(fan)應(ying)為(wei)無(wu)色(se)或(huo)極(ji)淺，依據(ju)所呈(cheng)顏色(se)的深(shen)淺，以(yi)“+"、“-"號表示(shi)。也可測(ce)OD值(zhi)：在ELISA檢(jian)測(ce)儀上，於(yu)450nm(若以ABTS顯(xian)色(se)，則410nm)處，以(yi)空白對(dui)照孔調零(ling)後測(ce)各孔OD值(zhi)，若大(da)於(yu)規定的陰性(xing)對(dui)照OD值(zhi)的2.1倍(bei)，即(ji)為陽(yang)性(xing)。

標(biao)本的采(cai)集(ji)及保存(cun)

1.血(xue)清：標(biao)本請於(yu)室溫(wen)放(fang)置(zhi)2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜後於(yu)1000 x g離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可檢(jian)測(ce)，或(huo)將標(biao)本放於(yu)-20℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。

2.血(xue)漿(jiang)：可用(yong)EDTA或(huo)肝(gan)素作為(wei)抗凝劑(ji)，標(biao)本采(cai)集(ji)後30分(fen)鐘(zhong)內於(yu)2 - 8° C 1000 x 離心(xin)15分(fen)鐘(zhong)，或(huo)將標(biao)本放於(yu)-20℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。

3.組織(zhi)勻(yun)漿(jiang): 將動物(wu)的組織(zhi)標(biao)本先用(yong)PBS洗滌(di),去除(chu)多余血(xue)液,勻(yun)漿(jiang)化(hua)後放在20 mL PBS中於(yu)-20° C放置(zhi)過夜,第二天,經過二次反(fan)復凍(dong)融(rong)破膜(mo),將勻(yun)漿(jiang)物(wu)5000x g離心(xin)5分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可檢(jian)測(ce)。

4.細(xi)胞(bao)培養(yang)物(wu)上(shang)清：請離心(xin)後收集(ji)上(shang)清，並將標(biao)本保存(cun)於(yu)-20℃，且(qie)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。