煙曲黴探(tan)針(zhen)法(fa)熒光定量(liang)PCR試劑(ji)盒檢測(ce)步驟

煙曲(qu)黴(mei)探(tan)針法(fa)熒光定量(liang)PCR試劑(ji)盒檢測(ce)步驟：

(1)將參照基(ji)因(yin)與待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)片段等(deng)比例連(lian)接(jie)，克隆(long)到(dao)同(tong)壹(yi)個(ge)質(zhi)粒(li)載體(ti)上，構(gou)建(jian)壹(yi)種可同(tong)時(shi)用於(yu)參(can)照基(ji)因(yin)以(yi)及待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)擴增(zeng)檢測(ce)的(de)標(biao)準(zhun)品，並將所得(de)標(biao)準(zhun)品按照濃(nong)度(du)梯度稀(xi)釋(shi)後(hou)同(tong)時(shi)用於(yu)繪(hui)制參(can)照基(ji)因(yin)以(yi)及待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)的(de)標(biao)準(zhun)曲線；

(2)待測(ce)樣本(ben)與(yu)步(bu)驟(1)所述標(biao)準(zhun)品經(jing)同(tong)步(bu)進(jin)行實(shi)時(shi)熒(ying)光定量(liang)PCR擴增(zeng)後(hou)，目(mu)的(de)基(ji)因(yin)與參照基(ji)因(yin)按照各(ge)自(zi)的(de)標(biao)準(zhun)曲線計(ji)算(suan)各自(zi)的(de)拷(kao)貝數(shu)，計(ji)算(suan)待測(ce)樣本(ben)的(de)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)與參照基(ji)因(yin)拷(kao)貝數(shu)比(bi)值(zhi)，即(ji)得(de)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)的(de)拷(kao)貝數(shu)相(xiang)對(dui)定量(liang)檢測(ce)結果。

其中(zhong)步(bu)驟(1)為(wei)：將參照基(ji)因(yin)與待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)片段等(deng)比例連(lian)接(jie)，克隆(long)到(dao)同(tong)壹(yi)個(ge)質(zhi)粒(li)載體(ti)上，構(gou)建(jian)壹(yi)種可同(tong)時(shi)用於(yu)參(can)照基(ji)因(yin)以(yi)及待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)擴增(zeng)檢測(ce)的(de)標(biao)準(zhun)品，並將所得(de)標(biao)準(zhun)品按照濃(nong)度(du)梯度稀(xi)釋(shi)後(hou)同(tong)時(shi)用於(yu)繪(hui)制參(can)照基(ji)因(yin)以(yi)及待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)的(de)標(biao)準(zhun)曲線。

其(qi)中所述參(can)照基(ji)因(yin)為(wei)本領(ling)域常(chang)規(gui)參(can)照基(ji)因(yin)，較(jiao)佳地(di)管(guan)家(jia)基(ji)因(yin)，優(you)選地(di)為(wei)RPPH1的(de)擴(kuo)增(zeng)區域，其(qi)中(zhong)所(suo)述質(zhi)粒(li)載體(ti)為(wei)本領(ling)域常(chang)規(gui)質(zhi)粒(li)載體(ti)，較(jiao)佳地(di)為(wei)PCR克隆(long)載體(ti)，優(you)選地(di)為(wei)TA cloning載體(ti)，所(suo)述TA cloning載體(ti)較(jiao)佳地(di)為(wei)pMD18-T載體(ti)。其(qi)中所(suo)述標(biao)準(zhun)品的(de)核(he)酸(suan)序(xu)列(lie)如序列(lie)表中SEQ ID NO:6所(suo)示(shi)。所(suo)述的(de)等(deng)比例較(jiao)佳地(di)為(wei)1：1。由於(yu)標(biao)準(zhun)品中(zhong)待測(ce)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)與參照基(ji)因(yin)的(de)比(bi)例為(wei)1:1，解決(jue)了(le)目(mu)前(qian)相(xiang)對(dui)標(biao)準(zhun)曲線法(fa)應用中(zhong)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)與參照基(ji)因(yin)的(de)濃(nong)度(du)比(bi)例關(guan)系(xi)難(nan)以(yi)控制的(de)問(wen)題，提(ti)高(gao)HER2基(ji)因(yin)擴增(zeng)檢測(ce)的(de)可靠(kao)性(xing)。

步(bu)驟(2)為(wei)：待測(ce)樣本(ben)與(yu)步(bu)驟(1)所述標(biao)準(zhun)品經(jing)同(tong)步(bu)進(jin)行實(shi)時(shi)熒(ying)光定量(liang)PCR擴增(zeng)後(hou)，目(mu)的(de)基(ji)因(yin)與參照基(ji)因(yin)按照各(ge)自(zi)的(de)標(biao)準(zhun)曲線計(ji)算(suan)各自(zi)的(de)拷(kao)貝數(shu)，計(ji)算(suan)待測(ce)樣本(ben)的(de)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)與參照基(ji)因(yin)拷(kao)貝數(shu)比(bi)值(zhi)，即(ji)得(de)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)的(de)拷(kao)貝數(shu)相(xiang)對(dui)定量(liang)檢測(ce)結果。