土(tu)壤木質(zhi)素(su)過氧(yang)化(hua)物酶(SLiP)測試(shi)盒(he)操作步(bu)驟(zhou)

土(tu)壤木質(zhi)素(su)過氧(yang)化(hua)物酶(SLiP)測試(shi)盒(he)操作步(bu)驟(zhou)：

1. 標(biao)準(zhun)品的(de)稀(xi)釋與加(jia)樣：在酶(mei)標(biao)包被板(ban)上(shang)設標準(zhun)品孔10孔，在(zai)*、第二(er)孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準(zhun)品100μl，然(ran)後(hou)在(zai)*、第(di)二(er)孔(kong)中加(jia)標準(zhun)品稀釋液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)從(cong)*孔(kong)、第(di)二(er)孔(kong)中各取100μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)三(san)孔和第(di)四(si)孔，再在(zai)第三(san)、第四(si)孔分別(bie)加(jia)標準(zhun)品稀釋液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)在(zai)第(di)三(san)孔和第(di)四(si)孔中先(xian)各取50μl棄(qi)掉，再各取50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)五(wu)、第(di)六孔中，再在(zai)第五(wu)、第(di)六孔中分(fen)別(bie)加(jia)標準(zhun)品稀釋液(ye)50ul，混勻(yun)；混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)五(wu)、第(di)六孔中各取50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)七、第(di)八孔中，再在(zai)第七、第(di)八孔中分(fen)別(bie)加(jia)標準(zhun)品稀釋液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七、第(di)八孔中分(fen)別(bie)取50μl加(jia)到第(di)九、第十孔(kong)中，再在(zai)第九第(di)十孔(kong)分別(bie)加(jia)標準(zhun)品稀釋液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔中各取50μl棄(qi)掉。

2. 加(jia)樣：分別(bie)設空(kong)白孔(kong)（空白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣品及酶標(biao)試劑，其余各步(bu)操(cao)作相同）、待(dai)測樣品孔。在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)待測樣品孔中先(xian)加(jia)樣品稀釋液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度(du)為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)於酶標(biao)板(ban)孔(kong)底部，盡(jin)量不(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備用(yong)。

5. 洗滌：小心揭(jie)掉封板(ban)膜(mo)，棄去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，靜置30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復(fu)5次，拍(pai)幹(gan)。 6. 加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入(ru)酶(mei)標試劑50μl，空白(bai)孔除外(wai)。

7. 溫育(yu)：操作同(tong)3。

8. 洗滌：操作同(tong)5。

9. 顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong).

10. 終止：每孔加(jia)終止液(ye)50μl，終止反應（此(ci)時藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。

11. 測定(ding)：以(yi)空白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm波(bo)長依序(xu)測量(liang)各孔的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應在加(jia)終止液(ye)後(hou)15分(fen)鐘(zhong)以(yi)內進(jin)行(xing)。