小鼠髓過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶（MPO）ELISA試(shi)劑(ji)盒操(cao)作步(bu)驟

小鼠髓過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶（MPO）ELISA試(shi)劑(ji)盒操(cao)作步(bu)驟：

1. 標準品(pin)的稀(xi)釋與(yu)加(jia)樣：在酶標包(bao)被板(ban)上(shang)設標準品(pin)孔10孔(kong)，在*、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)100μl，然(ran)後(hou)在*、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)從(cong)*孔(kong)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)100μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)三孔(kong)和第(di)四孔(kong)，再在第(di)三、第(di)四孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)在第(di)三孔(kong)和第(di)四孔(kong)中(zhong)先(xian)各(ge)取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)，再(zai)各取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)五(wu)、第(di)六孔中(zhong)，再(zai)在第(di)五(wu)、第(di)六孔中(zhong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50ul，混勻(yun)；混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)五(wu)、第(di)六孔中(zhong)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)七、第(di)八孔(kong)中(zhong)，再(zai)在第(di)七、第(di)八孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七、第(di)八孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)取(qu)50μl加(jia)到第(di)九、第(di)十(shi)孔中(zhong)，再(zai)在第(di)九第(di)十(shi)孔分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九第(di)十(shi)孔中(zhong)各(ge)取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)。

2. 加(jia)樣：分(fen)別(bie)設空白(bai)孔（空白(bai)對照(zhao)孔不(bu)加(jia)樣品(pin)及酶標試劑(ji)，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、待(dai)測樣品(pin)孔。在酶標包(bao)被板(ban)上(shang)待(dai)測樣品(pin)孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待(dai)測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終稀(xi)釋度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標板孔(kong)底部，盡量不(bu)觸(chu)及孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍(bei)）倍濃(nong)縮洗(xi)滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水30（48T的20倍(bei)）倍稀(xi)釋後(hou)備(bei)用(yong)。

5. 洗(xi)滌(di)：小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩幹，每孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，如(ru)此重復5次，拍幹。 6. 加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶標試劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外。

7. 溫(wen)育(yu)：操作(zuo)同3。

8. 洗滌(di)：操作(zuo)同(tong)5。

9. 顯(xian)色(se)：每(mei)孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震蕩混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong).

10. 終止：每孔(kong)加(jia)終止液(ye)50μl，終止反應(ying)（此(ci)時藍色(se)立(li)轉黃色(se)）。

11. 測(ce)定：以(yi)空白(bai)空調零，450nm波長(chang)依序(xu)測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在加(jia)終止液(ye)後(hou)15分(fen)鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行(xing)。