小(xiao)鼠(shu)細胞(bao)周期(qi)素D2（Cyclin-D2）ELISA免費代(dai)測(ce)試劑盒(he)​操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

小(xiao)鼠(shu)細胞(bao)周期(qi)素D2（Cyclin-D2）ELISA免(mian)費(fei)代(dai)測(ce)試劑盒(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

1. 標準品(pin)的(de)稀釋(shi)與加樣：在酶標包被板上(shang)設標準品(pin)孔(kong)10孔(kong)，在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加(jia)標準品(pin)100μl，然(ran)後在di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)加標準品(pin)稀釋(shi)液50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後從di壹(yi)孔(kong)、第二(er)孔(kong)中(zhong)各取(qu)100μl分別(bie)加(jia)到(dao)第三(san)孔(kong)和(he)第四(si)孔(kong)，再(zai)在第三(san)、第四(si)孔(kong)分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後在第三(san)孔(kong)和(he)第四(si)孔(kong)中(zhong)先各取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)，再(zai)各取(qu)50μl分別(bie)取(qu)50μl分別(bie)加(jia)到(dao)第七(qi)、第八(ba)孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第七(qi)、第八(ba)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液50μl，混(hun)勻(yun)後從第七(qi)、第八(ba)孔(kong)中(zhong)加到(dao)第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻(yun)後從第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)各分別(bie)取(qu)50μl加到(dao)第九(jiu)、第十(shi)孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第九(jiu)第十(shi)孔(kong)分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀釋(shi)液50μl，混(hun)勻(yun)後從第九(jiu)第十(shi)孔(kong)中(zhong)各取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)。（稀釋(shi)後各孔(kong)加(jia)樣量都(dou)為(wei)50μl，濃度(du)分別(bie)為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加(jia)樣：分別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣品(pin)及(ji)酶標試劑，其余各步(bu)操(cao)作(zuo)相同）、待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標包被板上(shang)待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先加樣品(pin)稀釋(shi)液40μl，然(ran)後再加待(dai)測(ce)樣品(pin)10μl（樣品(pin)最(zui)終(zhong)稀釋(shi)度(du)為(wei)5倍）。加樣將樣品(pin)加(jia)於(yu)酶標板孔(kong)底(di)部(bu)，盡量不(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封板膜封板後置37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

4. 配(pei)液：將30（48T的(de)20倍）倍濃縮(suo)洗滌液用蒸餾(liu)水(shui)30（48T的(de)20倍）倍稀釋(shi)後備用(yong)。

5. 洗(xi)滌：小(xiao)心(xin)揭掉(diao)封板膜，棄(qi)去液體(ti)，甩(shuai)幹，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液，靜置30秒(miao)後棄(qi)去，如(ru)此(ci)重復5次，拍幹。

6. 加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶標試劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。

7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。

8. 洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同5。

9. 顯(xian)色：每孔(kong)先加入(ru)顯色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光顯色15分鐘(zhong).

10. 終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反(fan)應（此(ci)時藍(lan)色立轉黃色）。

11. 測(ce)定：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm波(bo)長依序(xu)測(ce)量各孔(kong)的(de)吸光度(du)（OD值）。 測(ce)定應在加終(zhong)止(zhi)液後15分鐘(zhong)。