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小(xiao)鼠主要(yao)組織(zhi)相容性復合體(ti)Ⅰ類(lei)(MHCⅠ/H-2Ⅰ)酶聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒樣本處(chu)理及要(yao)求(qiu):
1. 血(xue)清(qing):室(shi)溫血(xue)液自然(ran)凝(ning)固(gu)10-20分(fen)鐘(zhong),離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收(shou)集上(shang)清(qing),保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)出(chu)現(xian)沈澱(dian),應再次離(li)心(xin)。
2. 血(xue)漿:應根(gen)據標本的(de)要(yao)求選(xuan)擇(ze)EDTA或檸檬酸(suan)鈉作為抗(kang)凝(ning)劑(ji),混(hun)合10-20分(fen)鐘(zhong)後,離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收(shou)集上(shang)清(qing),保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈(chen)澱(dian)形成,應該再次離(li)心(xin)。
3. 尿(niao)液:用(yong)無(wu)菌管收(shou)集,離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收(shou)集上(shang)清(qing),保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈(chen)澱(dian)形成,應再次離(li)心(xin)。胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦脊液參(can)照(zhao)實行(xing)。
4. 細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing):檢測(ce)分(fen)泌性的(de)成份(fen)時(shi),用(yong)無(wu)菌管收(shou)集。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收(shou)集上(shang)清(qing)。檢測(ce)細胞(bao)內(nei)的(de)成份(fen)時(shi),用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞(bao)懸液,細胞(bao)濃(nong)度(du)達到100萬/ml左右。通(tong)過(guo)反復凍融(rong),以(yi)使細胞(bao)破(po)壞(huai)並放出(chu)細胞(bao)內(nei)成份(fen)。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收(shou)集上(shang)清(qing)。保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈(chen)澱(dian)形成,應再次離(li)心(xin)。
5. 組織(zhi)標(biao)本:切割標本後,稱取(qu)重量。加(jia)入壹(yi)定量的(de)PBS,PH7.4。用(yong)液氮(dan)迅速(su)冷凍保(bao)存(cun)備(bei)用(yong)。標(biao)本融化後仍(reng)然(ran)保(bao)持2-8℃的(de)溫度(du)。加(jia)入壹(yi)定量的(de)PBS(PH7.4),用(yong)手(shou)工或勻漿器(qi)將(jiang)標(biao)本勻漿充(chong)分(fen)。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收(shou)集上(shang)清(qing)。分(fen)裝後壹(yi)份(fen)待檢測(ce),其余冷凍備(bei)用(yong)。
6. 標(biao)本采(cai)集後盡早(zao)進(jin)行(xing)提取(qu),提(ti)取(qu)按(an)相關文(wen)獻(xian)進(jin)行(xing),提取(qu)後(hou)應盡快進(jin)行(xing)實驗。若不(bu)能馬上(shang)進(jin)行(xing)試(shi)驗,可將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃保(bao)存,但(dan)應避免反復凍融(rong).
7. 不(bu)能檢測(ce)含NaN3的(de)樣品(pin),因(yin)NaN3抑(yi)制辣根過氧化物酶(mei)的(de)(HRP)活(huo)性(xing)。
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