植(zhi)物(wu)鈣調素（CAM）ELISA免費代測試劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

　　植(zhi)物(wu)鈣調素（CAM）ELISA免費代測試劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：
 

　　1. 標準(zhun)品(pin)的稀釋與加樣(yang)：在(zai)酶標包(bao)被(bei)板上設標準(zhun)品(pin)孔10孔(kong)，在(zai)*、第二孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加標準(zhun)品(pin)100μl，然(ran)後(hou)在(zai)*、第二孔(kong)中(zhong)加標準(zhun)品(pin)稀釋液50μl，混勻；然(ran)後(hou)從*孔(kong)、第二孔(kong)中(zhong)各取(qu)100μl分(fen)別(bie)加到第三(san)孔(kong)和(he)第四孔(kong)，再在(zai)第三(san)、第四孔(kong)分(fen)別(bie)加標準(zhun)品(pin)稀釋液50μl，混勻；然(ran)後(hou)在(zai)第三(san)孔(kong)和(he)第四孔(kong)中(zhong)先各取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)，再各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加到第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加標準(zhun)品(pin)稀釋液50ul，混勻；混(hun)勻後(hou)從第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加到第七、第八孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第七、第八孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加標準(zhun)品(pin)稀釋液50μl，混勻後(hou)從第七、第八孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)取(qu)50μl加到第九、第十孔(kong)中(zhong)，再在(zai)第九第十孔(kong)分(fen)別(bie)加標準(zhun)品(pin)稀釋液50μl，混勻後(hou)從第九第十孔(kong)中(zhong)各取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)。
 

　　2. 加樣(yang)：分(fen)別(bie)設空(kong)白孔(空白對(dui)照孔不加樣(yang)品(pin)及酶標試(shi)劑(ji)，其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong))、待測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶標包(bao)被(bei)板上待測樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先加樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然(ran)後(hou)再加待測樣(yang)品(pin)10μl(樣(yang)品(pin)zui終稀釋度為5倍)。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加於酶標板孔底(di)部，盡(jin)量不觸(chu)及孔壁(bi)，輕(qing)輕晃動(dong)混勻。
 

　　3. 溫(wen)育(yu)：用封板膜(mo)封板後置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。
 

　　4. 配(pei)液：將(jiang)30(48T的(de)20倍)倍濃縮洗滌(di)液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後(hou)備用(yong)。
 

　　5. 洗滌(di)：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩(shuai)幹，每孔加滿洗滌(di)液，靜置(zhi)30秒後棄(qi)去(qu)，如此重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)幹。 6. 加酶：每孔加入(ru)酶標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。
 

　　7. 溫育：操(cao)作(zuo)同(tong)3。
 

　　8. 洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同(tong)5。
 

　　9. 顯色(se)：每孔先加入(ru)顯色(se)劑(ji)A50μl，再加入(ru)顯色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光顯色(se)15分(fen)鐘(zhong).
 

　　10. 終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終止反應(此(ci)時藍色(se)立(li)轉黃(huang)色(se))。
 

　　11. 測定：以空(kong)白空調零，450nm波(bo)長依(yi)序測量各(ge)孔的(de)吸光度(OD值)。 測定應在(zai)加終(zhong)止液後15分(fen)鐘(zhong)以內(nei)進行。