小(xiao)鼠(shu)小(xiao)梁(liang)網(wang)細胞(bao)提(ti)取(qu)物(wu)培(pei)養(yang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)方案(an)

小鼠(shu)小(xiao)梁(liang)網(wang)細胞(bao)提(ti)取(qu)物(wu)培(pei)養(yang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)方案(an)：

以(yi)下(xia)實(shi)驗方(fang)案(an)介(jie)紹(shao)了(le)培(pei)養(yang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)的壹(yi)般流(liu)程。詳(xiang)細(xi)的(de)實(shi)驗方(fang)案(an)，必(bi)須參閱(yue)針(zhen)對具體(ti)細胞(bao)的(de)產(chan)品說(shuo)明書(shu)。 

1.配制凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)，於(yu)2°C至(zhi)8°C下(xia)儲存(cun)，直(zhi)至(zhi)使(shi)用(yong)。請註意(yi)使(shi)用(yong)何種凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)取決於(yu)所(suo)用(yong)細胞(bao)系(xi)。

2.凍(dong)存(cun)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)時(shi)，利用(yong)傳代(dai)時所(suo)用(yong)方法(fa)輕(qing)柔(rou)地(di)使(shi)細(xi)胞(bao)從組(zu)織培(pei)養(yang)容器上(shang)脫離下來(lai)。用(yong)該(gai)細(xi)胞(bao)所(suo)需培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)新懸浮(fu)細胞(bao)。

3.采(cai)用(yong)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)器、細胞(bao)計(ji)數(shu)儀按(an)照臺(tai)盼(pan)藍(lan)拒(ju)染(ran)法(fa)或者(zhe)使(shi)用(yong) Countess®自動(dong)細胞(bao)計(ji)數(shu)儀測(ce)定(ding)總(zong)細(xi)胞(bao)數(shu)和(he)活細(xi)胞(bao)百(bai)分(fen)比。根據(ju)所(suo)需活(huo)細胞(bao)密度(du)，計(ji)算(suan)凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)需要(yao)量。

4.以(yi)大(da)約(yue)100-200×g的離心(xin)力(li)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)離心(xin)5至(zhi)10分(fen)鐘(zhong)。在(zai)無菌(jun)條件(jian)下小(xiao)心(xin)倒(dao)掉(diao)上(shang)清(qing)液(ye)，不(bu)要(yao)攪動細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

註：離心(xin)速(su)度(du)和(he)時間取(qu)決於(yu)細(xi)胞(bao)種類。

5.用(yong)預冷的(de)凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)新懸浮(fu)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)，將(jiang)其(qi)調整至(zhi)該(gai)細(xi)胞(bao)適(shi)合(he)的活(huo)細胞(bao)密度(du)。

6.將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)分(fen)裝(zhuang)到若幹(gan)凍(dong)存(cun)管中(zhong)。分(fen)裝(zhuang)時，應(ying)不(bu)時輕(qing)輕(qing)混(hun)合(he)細胞(bao)，使(shi)其(qi)保(bao)持均勻的細(xi)胞(bao)懸液(ye)狀(zhuang)態(tai)。

7.使用(yong)可(ke)控(kong)制降溫(wen)速度(du)的(de)冷凍(dong)裝(zhuang)置(zhi)冷凍(dong)細(xi)胞(bao)，使(shi)溫(wen)度(du)每(mei)分(fen)鐘(zhong)大約(yue)降低(di)  1°C。或者(zhe)，將(jiang)裝(zhuang)有細胞(bao)的(de)凍(dong)存(cun)管放入凍(dong)存(cun)盒(he)中(zhong)，然後(hou)將(jiang)凍(dong)存(cun)盒(he)置(zhi)於(yu)-80°C條件(jian)下過(guo)夜(ye)。