大鼠可溶(rong)性(xing)Toll樣(yang)受(shou)體2（sTLR2）ELISA免費代(dai)測(ce)試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟

大鼠可溶(rong)性(xing)Toll樣(yang)受(shou)體2（sTLR2）ELISA免費代(dai)測(ce)試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟：

1. 標準品(pin)的稀(xi)釋(shi)與加(jia)樣：在酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)上設(she)標準品(pin)孔10孔，在*、第(di)二孔中分別(bie)加(jia)標準品(pin)100μl，然後在*、第(di)二孔中加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻；然後從(cong)*孔、第二(er)孔中各取100μl分別(bie)加(jia)到第(di)三孔和第(di)四孔，再在第(di)三、第(di)四孔分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻；然後在第(di)三孔和第(di)四孔中先(xian)各取50μl棄(qi)掉，再各取50μl分別(bie)加(jia)到第(di)五、第(di)六(liu)孔中，再在第(di)五、第(di)六孔中分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50ul，混(hun)勻；混(hun)勻後從(cong)第五(wu)、第六(liu)孔中各取50μl分別(bie)加(jia)到第(di)七、第(di)八(ba)孔中，再在第(di)七、第(di)八孔中分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻後從(cong)第七(qi)、第八(ba)孔中分別(bie)取50μl加(jia)到(dao)第(di)九(jiu)、第十孔中，再在第(di)九第(di)十孔分別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻後從(cong)第九(jiu)第十孔中各取50μl棄(qi)掉。

2. 加樣(yang)：分別(bie)設(she)空白孔（空白對(dui)照(zhao)孔不加(jia)樣品(pin)及酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其余各步操作相同(tong)）、待測樣品(pin)孔。在酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)上待測樣品(pin)孔中先(xian)加樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然後再加待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣品(pin)加於酶(mei)標板(ban)孔底部(bu)，盡量不(bu)觸(chu)及孔壁，輕(qing)輕晃(huang)動混(hun)勻。

3. 溫(wen)育：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)後置37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。

4. 配(pei)液：將(jiang)30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮洗滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水30（48T的(de)20倍）倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備用(yong)。

5. 洗(xi)滌：小心揭掉封板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體，甩(shuai)幹，每(mei)孔加滿洗滌液，靜置30秒(miao)後棄(qi)去(qu)，如此重(zhong)復(fu)5次，拍幹。 6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔加入(ru)酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白孔除外(wai)。

7. 溫(wen)育：操作同(tong)3。

8. 洗滌：操作(zuo)同(tong)5。

9. 顯色：每(mei)孔先加(jia)入(ru)顯色劑A50μl，再加入(ru)顯色劑B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光(guang)顯色15分鐘(zhong).

10. 終止(zhi)：每(mei)孔加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應（此時藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

11. 測定(ding)：以空白空調零(ling)，450nm波長依序測量各孔的吸光(guang)度（OD值）。 測(ce)定應在加終止(zhi)液後15分鐘(zhong)以內進行。