兔抗(kang)人(ren)堿性(xing)成纖維細胞(bao)生長因(yin)子(zi)多(duo)克隆(long)抗(kang)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟

兔抗(kang)人(ren)堿性(xing)成纖維細胞(bao)生長因(yin)子(zi)多(duo)克隆(long)抗(kang)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟：

1、 十(shi)二(er)烷(wan)基硫(liu)#鈉SDS溶(rong)液:0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去離子(zi)水(shui)配制(zhi)，室溫保(bao)存。

2、 分離膠(jiao)緩沖(chong)液:.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和(he)48mlmol/L HCl 混(hun)合，加水(shui)稀釋(shi)到，b-FGFWestern  

3、 濃縮(suo)膠(jiao)緩沖(chong)液:0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶(rong)於40mlH2O中(zhong)，用(yong)約48ml mol/L HCl調至(zhi)pH6.8加水(shui)稀釋(shi)到00ml終(zhong)體積。過(guo)濾後40C保(bao)存。這(zhe)兩(liang)種緩沖(chong)液必須使(shi)用(yong)Tris堿制(zhi)備(bei)，再(zai)用(yong)HCL調節PH值，而不用(yong) Tris.CL。

4、 TEMED原溶(rong)液N，N，N’N’四甲基乙(yi)二(er)胺催化過(guo)硫(liu)#銨形(xing)成自由基而加速兩(liang)種丙稀酰胺的(de)聚合。

5、 SDS- PAGE加樣緩沖(chong)液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩沖(chong)液8ml，甘(gan)油(you)6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰基乙(yi)醇(chun)3.2ml，0.05%溴(xiu)酚藍.6ml，H2O 32ml混(hun)勻備用(yong)。按:或(huo):2比例(li)與(yu)蛋白(bai)質(zhi)樣品混(hun)合，在(zai)沸(fei)水(shui)終(zhong)煮3min混(hun)勻後再(zai)上樣，壹(yi)般為(wei)20-25ul，總(zong)蛋白(bai)量(liang)00μg。

6、 Tris-甘(gan)氨(an)#電泳緩沖(chong)液:30.3gTris，88g甘(gan)氨(an)#，0gSDS，用(yong)蒸餾水(shui)溶(rong)解至(zhi)000ml，得0.25mol/L Tris-.92mol/L甘(gan)氨(an)#電極緩(huan)沖(chong)液。臨用(yong)前稀釋(shi)0倍(bei)。

7、 轉(zhuan)移緩沖(chong)液：配制L轉(zhuan)移緩沖(chong)液，需稱(cheng)取2.9g甘(gan)氨(an)#、5.8gTris堿、0.37g SDS，並(bing)加入(ru)200ml甲醇(chun)，加水(shui)至(zhi)總(zong)量(liang)L。

8、 麗春(chun)紅染(ran)液儲(chu)存液：麗春(chun)紅S 2g 三(san)#乙(yi)#30g 磺基水楊# 30g 加水(shui)至(zhi)00ml 用(yong)時(shi)上述(shu)儲(chu)存液稀釋(shi)0倍(bei)即(ji)成麗春(chun)紅S使(shi)用(yong)液。使(shi)用(yong)後應(ying)予(yu)以(yi)廢棄。