綿(mian)羊(yang)源(yuan)性(xing)成分探針(zhen)法(fa)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR試劑盒​檢(jian)測方(fang)法(fa)包括以(yi)下步驟(zhou)

綿(mian)羊(yang)源(yuan)性(xing)成分探針(zhen)法(fa)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR試劑盒檢(jian)測方(fang)法(fa)包括以(yi)下步驟(zhou)：

(1)將參(can)照(zhao)基因與(yu)待(dai)測目(mu)的(de)基因片(pian)段(duan)等(deng)比例(li)連接(jie)，克隆到同壹(yi)個(ge)質(zhi)粒(li)載(zai)體(ti)上，構(gou)建(jian)壹(yi)種(zhong)可(ke)同時(shi)用(yong)於(yu)參(can)照(zhao)基因以(yi)及(ji)待(dai)測目(mu)的(de)基因擴增(zeng)檢(jian)測的(de)標準(zhun)品，並(bing)將所得(de)標準(zhun)品按(an)照(zhao)濃(nong)度(du)梯(ti)度稀(xi)釋(shi)後同時(shi)用(yong)於(yu)繪(hui)制(zhi)參照基因以(yi)及(ji)待(dai)測目(mu)的(de)基因的標準(zhun)曲線(xian)；

(2)待(dai)測樣(yang)本(ben)與(yu)步(bu)驟(1)所述標準(zhun)品經(jing)同步(bu)進(jin)行(xing)實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)後(hou)，目的基因與(yu)參(can)照基因按(an)照(zhao)各(ge)自的標準(zhun)曲線(xian)計算(suan)各自的拷(kao)貝(bei)數(shu)，計算(suan)待(dai)測樣(yang)本(ben)的目的基因與(yu)參(can)照基因拷(kao)貝(bei)數(shu)比值，即得(de)目(mu)的(de)基因的拷(kao)貝(bei)數(shu)相(xiang)對定(ding)量(liang)檢(jian)測結(jie)果(guo)。

其中步驟(1)為：將參(can)照(zhao)基因與(yu)待(dai)測目(mu)的(de)基因片(pian)段(duan)等(deng)比例(li)連接(jie)，克隆到同壹(yi)個(ge)質(zhi)粒(li)載(zai)體(ti)上，構(gou)建(jian)壹(yi)種(zhong)可(ke)同時(shi)用(yong)於(yu)參(can)照(zhao)基因以(yi)及(ji)待(dai)測目(mu)的(de)基因擴增(zeng)檢(jian)測的(de)標準(zhun)品，並(bing)將所得(de)標準(zhun)品按(an)照(zhao)濃(nong)度(du)梯(ti)度稀(xi)釋(shi)後同時(shi)用(yong)於(yu)繪(hui)制(zhi)參照基因以(yi)及(ji)待(dai)測目(mu)的(de)基因的標準(zhun)曲線(xian)。

其(qi)中所述參(can)照基因為本領(ling)域(yu)常(chang)規(gui)參照基因，較(jiao)佳地(di)管(guan)家(jia)基因，優選(xuan)地(di)為RPPH1的擴增(zeng)區(qu)域(yu)，其中所述質(zhi)粒載(zai)體(ti)為本領(ling)域(yu)常(chang)規(gui)質粒載(zai)體(ti)，較(jiao)佳地(di)為PCR克隆載(zai)體(ti)，優(you)選(xuan)地(di)為TA cloning載(zai)體(ti)，所述TA cloning載(zai)體(ti)較(jiao)佳地(di)為pMD18-T載(zai)體(ti)。其(qi)中所述標準(zhun)品的核(he)酸(suan)序(xu)列如(ru)序(xu)列表(biao)中SEQ ID NO:6所示。所述的(de)等(deng)比例(li)較(jiao)佳地(di)為1：1。由(you)於標準(zhun)品中待(dai)測目(mu)的(de)基因與(yu)參(can)照基因的比例(li)為1:1，解決(jue)了(le)目前(qian)相(xiang)對標準(zhun)曲線(xian)法(fa)應(ying)用(yong)中目的基因與(yu)參(can)照基因的濃(nong)度(du)比例(li)關系難(nan)以(yi)控(kong)制(zhi)的問(wen)題，提(ti)高HER2基因擴增(zeng)檢(jian)測的(de)可(ke)靠(kao)性(xing)。

步驟(zhou)(2)為：待(dai)測樣(yang)本(ben)與(yu)步(bu)驟(1)所述標準(zhun)品經(jing)同步(bu)進(jin)行(xing)實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)後(hou)，目的基因與(yu)參(can)照基因按(an)照(zhao)各(ge)自的標準(zhun)曲線(xian)計算(suan)各自的拷(kao)貝(bei)數(shu)，計算(suan)待(dai)測樣(yang)本(ben)的目的基因與(yu)參(can)照基因拷(kao)貝(bei)數(shu)比值，即得(de)目(mu)的(de)基因的拷(kao)貝(bei)數(shu)相(xiang)對定(ding)量(liang)檢(jian)測結(jie)果(guo)。

其中所述待(dai)測目(mu)的(de)基因為本領(ling)域(yu)常(chang)規(gui)待(dai)測目(mu)的(de)基因，較(jiao)佳地(di)為腫瘤(liu)或(huo)者(zhe)疾病(bing)的(de)特(te)異(yi)性(xing)基因，更佳地(di)為HER2基因的擴增(zeng)區(qu)域(yu)，所述熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)為本領(ling)域(yu)常(chang)規(gui)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)方(fang)法(fa)，所述熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)方(fang)法(fa)較(jiao)佳地(di)為多(duo)通道(dao)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)，更佳地(di)為雙通道(dao)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)。