​皮膚(fu)基(ji)底細胞癌(ai)細胞的操作步驟(zhou)

皮(pi)膚(fu)基(ji)底細胞癌(ai)細胞的操作步驟(zhou)主要包(bao)括以下(xia)幾個(ge)方(fang)面(mian)：

細胞復(fu)蘇(su)：將含(han)有1mL細胞懸液的凍(dong)存(cun)管在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加入(ru)5mL培(pei)養基(ji)混合均(jun)勻(yun)。然後將所有細胞懸液加入(ru)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或將細胞懸液加入(ru)6cm皿(min)中(zhong)），培(pei)養過夜(ye)。第(di)二(er)天(tian)換液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密(mi)度2。

細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞密(mi)度達(da)80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養。棄去培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。加1-2ml消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2min，然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞消化(hua)情況，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿回操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶後加5ml以上(shang)含(han)10%血(xue)清(qing)的培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞，脫落(luo)後吸出(chu)，在(zai)1000RPM條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)8-10分(fen)鐘，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2mL培(pei)養液後吹(chui)勻(yun)。按5-6ml/瓶補加培(pei)養液，將細胞懸液按(an)1：2的比例分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)5-6ml培(pei)養液的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)2。

細胞凍(dong)存(cun)：細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶的80%面積時(shi)，棄25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用PBS清洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)。添(tian)加0.25%消化(hua)液(ye)約1ml至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養液終(zhong)止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至15ml離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm離心(xin)5min。用(yong)適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)重懸細胞，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中(zhong)。先將細胞凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於-20℃1.5h，然後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃2。

以上(shang)就(jiu)是(shi)皮(pi)膚基(ji)底細胞癌(ai)細胞的基(ji)本操作步驟(zhou)。需要註意(yi)的是，這(zhe)些操作應在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)進(jin)行(xing)，以避免汙(wu)染。