科(ke)研（OC43/HKU1）核酸(suan)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒方法包(bao)括以(yi)下(xia)步(bu)驟(zhou)

科(ke)研（OC43/HKU1）核酸(suan)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒方法包(bao)括以(yi)下(xia)步(bu)驟(zhou)：

(1)將參照基(ji)因(yin)與待(dai)測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)片段等(deng)比例連接(jie)，克隆(long)到(dao)同壹個(ge)質(zhi)粒載(zai)體(ti)上(shang)，構建(jian)壹種(zhong)可同(tong)時(shi)用(yong)於(yu)參照(zhao)基(ji)因(yin)以(yi)及(ji)待測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)擴(kuo)增檢測(ce)的(de)標準品(pin)，並將(jiang)所(suo)得標準品(pin)按照(zhao)濃度梯(ti)度稀釋後同(tong)時(shi)用(yong)於(yu)繪制(zhi)參照(zhao)基(ji)因(yin)以(yi)及(ji)待測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)的(de)標準曲(qu)線(xian)；

(2)待(dai)測(ce)樣(yang)本與步(bu)驟(zhou)(1)所(suo)述標準品(pin)經同(tong)步(bu)進(jin)行(xing)實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增後，目(mu)的(de)基因(yin)與參(can)照基(ji)因(yin)按(an)照各自的(de)標準曲(qu)線(xian)計(ji)算(suan)各自的(de)拷貝(bei)數(shu)，計(ji)算(suan)待測(ce)樣(yang)本的(de)目(mu)的(de)基因(yin)與參(can)照基(ji)因(yin)拷(kao)貝(bei)數(shu)比值，即(ji)得(de)目(mu)的(de)基因(yin)的(de)拷貝(bei)數(shu)相(xiang)對(dui)定(ding)量(liang)檢測(ce)結果(guo)。

其中(zhong)步(bu)驟(zhou)(1)為(wei)：將參(can)照(zhao)基(ji)因(yin)與待(dai)測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)片段等(deng)比例連接(jie)，克隆(long)到(dao)同壹個(ge)質(zhi)粒載(zai)體(ti)上(shang)，構建(jian)壹種(zhong)可同(tong)時(shi)用(yong)於(yu)參照(zhao)基(ji)因(yin)以(yi)及(ji)待測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)擴(kuo)增檢測(ce)的(de)標準品(pin)，並將(jiang)所(suo)得標準品(pin)按照(zhao)濃度梯(ti)度稀釋後同(tong)時(shi)用(yong)於(yu)繪制(zhi)參照(zhao)基(ji)因(yin)以(yi)及(ji)待測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)的(de)標準曲(qu)線(xian)。

其中(zhong)所(suo)述參(can)照基因(yin)為(wei)本領域(yu)常(chang)規參(can)照基(ji)因(yin)，較(jiao)佳(jia)地(di)管(guan)家(jia)基(ji)因(yin)，優(you)選地為(wei)RPPH1的(de)擴(kuo)增區域(yu)，其中(zhong)所(suo)述質(zhi)粒載(zai)體(ti)為(wei)本領域(yu)常(chang)規質(zhi)粒載(zai)體(ti)，較(jiao)佳(jia)地(di)為(wei)PCR克隆(long)載(zai)體(ti)，優選(xuan)地為(wei)TA cloning載(zai)體(ti)，所(suo)述TA cloning載(zai)體(ti)較(jiao)佳(jia)地(di)為(wei)pMD18-T載(zai)體(ti)。其中(zhong)所(suo)述標準品(pin)的(de)核酸(suan)序(xu)列如序(xu)列表中(zhong)SEQ ID NO:6所(suo)示。所(suo)述的(de)等比(bi)例較(jiao)佳(jia)地(di)為(wei)1：1。由於(yu)標準品(pin)中(zhong)待(dai)測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)與參(can)照基(ji)因(yin)的(de)比例(li)為(wei)1:1，解(jie)決了(le)目(mu)前(qian)相(xiang)對(dui)標準曲(qu)線(xian)法應(ying)用(yong)中(zhong)目(mu)的(de)基因(yin)與參(can)照基(ji)因(yin)的(de)濃度比(bi)例(li)關(guan)系難以(yi)控(kong)制的(de)問題，提(ti)高HER2基(ji)因(yin)擴(kuo)增檢測(ce)的(de)可靠性(xing)。

步(bu)驟(zhou)(2)為(wei)：待測(ce)樣(yang)本與步(bu)驟(zhou)(1)所(suo)述標準品(pin)經同(tong)步(bu)進(jin)行(xing)實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增後，目(mu)的(de)基因(yin)與參(can)照基(ji)因(yin)按(an)照各自的(de)標準曲(qu)線(xian)計(ji)算(suan)各自的(de)拷貝(bei)數(shu)，計(ji)算(suan)待測(ce)樣(yang)本的(de)目(mu)的(de)基因(yin)與參(can)照基(ji)因(yin)拷(kao)貝(bei)數(shu)比值，即(ji)得(de)目(mu)的(de)基因(yin)的(de)拷貝(bei)數(shu)相(xiang)對(dui)定(ding)量(liang)檢測(ce)結果(guo)。

其中(zhong)所(suo)述待(dai)測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)為(wei)本領域(yu)常(chang)規待(dai)測(ce)目(mu)的(de)基因(yin)，較(jiao)佳(jia)地(di)為(wei)腫(zhong)瘤或(huo)者(zhe)疾病(bing)的(de)特異性(xing)基因(yin)，更(geng)佳地為(wei)HER2基因(yin)的(de)擴(kuo)增區域(yu)，所(suo)述熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增為(wei)本領域(yu)常(chang)規熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增方法，所(suo)述熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增方法較(jiao)佳(jia)地(di)為(wei)多通(tong)道(dao)熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增，更佳(jia)地為(wei)雙通道熒(ying)光(guang)定量PCR擴(kuo)增。