大鼠(shu)腸(chang)脂肪(fang)酸(suan)結(jie)合蛋白（iFABP）ELISA免費(fei)代測試(shi)劑(ji)盒操(cao)作(zuo)步驟

大鼠(shu)腸(chang)脂肪(fang)酸(suan)結(jie)合蛋白（iFABP）ELISA免費(fei)代測試(shi)劑(ji)盒操(cao)作(zuo)步驟

1. 標準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)與加(jia)樣(yang)：在酶標包被(bei)板(ban)上設(she)標準品(pin)孔(kong)10孔(kong)，在di壹(yi)、第二孔(kong)中分別加(jia)標準品(pin)100μl，然(ran)後(hou)在(zai)di壹(yi)、第二孔(kong)中加標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後(hou)從(cong)di壹(yi)孔(kong)、第二(er)孔(kong)中各取(qu)100μl分(fen)別加(jia)到第三孔(kong)和第四(si)孔(kong)，再(zai)在(zai)第三(san)、第四(si)孔(kong)分別加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後(hou)在(zai)第(di)三孔(kong)和第四(si)孔(kong)中先(xian)各取50μl棄掉，再(zai)各(ge)取50μl分(fen)別取(qu)50μl分(fen)別加(jia)到第七、第八孔(kong)中，再(zai)在(zai)第七(qi)、第八孔(kong)中分別加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七、第八孔(kong)中加到第五、第六(liu)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第五(wu)、第六(liu)孔(kong)中分別加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻後(hou)從(cong)第(di)五、第六孔(kong)中各分(fen)別取(qu)50μl加(jia)到第九、第(di)十(shi)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第九第(di)十(shi)孔(kong)分別加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九第(di)十(shi)孔(kong)中各取(qu)50μl棄(qi)掉。（稀(xi)釋(shi)後(hou)各(ge)孔(kong)加樣(yang)量都(dou)為(wei)50μl，濃度分別為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加(jia)樣(yang)：分別設(she)空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品(pin)及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其余(yu)各步(bu)操作(zuo)相同(tong)）、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標包被(bei)板(ban)上待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最(zui)終稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)於酶標板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡量不觸及(ji)孔(kong)壁，輕輕晃動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用封板(ban)膜封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘。

4. 配(pei)液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾(liu)水(shui)30（48T的20倍）倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用。

5. 洗滌：小心(xin)揭(jie)掉封板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩幹，每孔(kong)加滿(man)洗滌液，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄(qi)去(qu)，如此重復5次(ci)，拍(pai)幹。

6. 加酶：每(mei)孔(kong)加入(ru)酶標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除外。

7. 溫育：操作(zuo)同(tong)3。

8. 洗(xi)滌：操作(zuo)同(tong)5。

9. 顯(xian)色：每孔(kong)先(xian)加入顯色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻，37℃避(bi)光顯(xian)色15分鐘.

10. 終止：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終止反(fan)應（此時(shi)藍(lan)色(se)立轉黃色(se)）。

11. 測定(ding)：以空(kong)白空(kong)調零，450nm波(bo)長依(yi)序測量各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定(ding)應在(zai)加終(zhong)止液(ye)後(hou)15分(fen)鐘(zhong)。