低轉移肺癌細(xi)胞(bao)實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)步(bu)驟

低轉移肺癌細(xi)胞(bao)實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)步(bu)驟

實(shi)驗(yan)準(zhun)備

細胞(bao)系選擇：選擇低轉移性的(de)肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao)系，如A549、H1299等。

試(shi)劑和(he)耗(hao)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備細胞(bao)培養基（如DMEM或RPMI-1640）、血清(qing)（如FBS）、抗生素(su)、PBS緩(huan)沖(chong)液等。

儀器設備(bei)準(zhun)備：準(zhun)備細胞(bao)培養箱、倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)、離(li)心(xin)機(ji)、移液器等。

細胞復蘇

從(cong)液氮中(zhong)取(qu)出凍(dong)存(cun)的(de)細(xi)胞(bao)，迅(xun)速(su)放入37°C水浴中(zhong)解(jie)凍。

將(jiang)解(jie)凍後(hou)的(de)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉移至含有適量培養基的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)。

1000 rpm離心(xin)5分(fen)鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，加(jia)入適量新(xin)鮮(xian)培養基重懸細(xi)胞。

將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉移至培養瓶中(zhong)，置(zhi)於37°C、5% CO2的(de)培養箱中(zhong)培養。

細胞傳(chuan)代

當細(xi)胞生長(chang)至(zhi)80-90%匯合(he)時，進行傳(chuan)代。

用PBS緩(huan)沖(chong)液輕輕洗滌(di)細胞(bao)，去(qu)除培養基。

加(jia)入適量胰白酶，37°C孵育(yu)1-2分(fen)鐘(zhong)，直(zhi)至(zhi)細胞(bao)從(cong)瓶壁脫落。

加(jia)入等量含血清(qing)的(de)培養基，終(zhong)止胰白酶作用。

1000 rpm離(li)心(xin)5分(fen)鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，加(jia)入適量新(xin)鮮(xian)培養基重懸細(xi)胞。

按(an)照(zhao)1:2或1:3的(de)比(bi)例(li)將(jiang)細(xi)胞懸液分(fen)至新(xin)的(de)培養瓶中(zhong)，置(zhi)於培養箱中(zhong)繼(ji)續(xu)培養。

細胞實(shi)驗(yan)

增(zeng)殖(zhi)實驗(yan)：使(shi)用CCK-8試(shi)劑盒(he)或MTT法檢測(ce)細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)能力(li)。

遷(qian)移實驗(yan)：使(shi)用Transwell小(xiao)室或劃(hua)痕實(shi)驗(yan)檢(jian)測(ce)細(xi)胞(bao)遷(qian)移能力(li)。

侵(qin)襲實(shi)驗(yan)：使(shi)用Matrigel包(bao)被的(de)Transwell小(xiao)室檢(jian)測細胞侵(qin)襲能力(li)。

基因表達分(fen)析：使用qRT-PCR或Western Blot檢(jian)測相(xiang)關基因或蛋(dan)白的(de)表達水平。

數(shu)據分(fen)析

收集(ji)實驗(yan)數(shu)據(ju)，使(shi)用統計軟件（如SPSS、GraphPad Prism）進(jin)行(xing)數(shu)據(ju)分(fen)析。

繪制圖(tu)表，進(jin)行(xing)統計學分(fen)析，得出實(shi)驗(yan)結論(lun)。

實驗(yan)記(ji)錄(lu)

詳(xiang)細(xi)記(ji)錄(lu)實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)步(bu)驟、實(shi)驗(yan)條(tiao)件、實驗(yan)結果(guo)等信息(xi)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)參考(kao)和復現。

請(qing)註意，以(yi)上(shang)步(bu)驟僅(jin)為壹般性指導，具體(ti)實驗(yan)操(cao)作(zuo)應(ying)根據(ju)實(shi)驗(yan)室(shi)標(biao)準(zhun)操作規程（SOP）和實(shi)驗(yan)設(she)計(ji)進(jin)行(xing)調(tiao)整(zheng)。如果(guo)您(nin)需要(yao)更詳(xiang)細(xi)的(de)實(shi)驗(yan)步(bu)驟或有其他相(xiang)關(guan)問題(ti)，建議(yi)咨(zi)詢實(shi)驗(yan)室(shi)導師或查閱相關文(wen)獻(xian)。