人(ren)幹擾(rao)素(su)調節(jie)因(yin)子(zi)(IRF)ELISA試(shi)劑(ji)盒操(cao)作步(bu)驟

人(ren)幹擾(rao)素(su)調節(jie)因(yin)子(zi)(IRF)ELISA試(shi)劑(ji)盒操(cao)作步(bu)驟

1. 標(biao)準(zhun)品(pin)的稀釋(shi)與(yu)加樣(yang)：在(zai)酶標(biao)包(bao)被板上(shang)設(she)標(biao)準(zhun)品(pin)孔10孔(kong)，在(zai)di壹、第二(er)孔(kong)中分別加標(biao)準(zhun)品(pin)100μl，然後在(zai)di壹、第二(er)孔(kong)中加標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後從di壹孔、第(di)二(er)孔(kong)中各取(qu)100μl分別加到第三(san)孔和(he)第四(si)孔，再(zai)在(zai)第三(san)、第四(si)孔分別加標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然(ran)後在(zai)第三(san)孔和(he)第四(si)孔中先(xian)各取(qu)50μl棄(qi)掉，再各取(qu)50μl分別取(qu)50μl分別加到第七、第八孔中，再(zai)在(zai)第七、第八孔中分別加標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從第七、第八孔中加到第五、第(di)六孔中，再(zai)在(zai)第五、第(di)六孔中分別加標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻(yun)後從第五、第(di)六孔中各分別取(qu)50μl加到第九(jiu)、第(di)十(shi)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)分別加標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後從第九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)中各取(qu)50μl棄(qi)掉。（稀釋(shi)後各孔加樣(yang)量(liang)都(dou)為(wei)50μl，濃度(du)分別為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣(yang)：分別設(she)空白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余(yu)各步操(cao)作相(xiang)同(tong)）、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被板上(shang)待測(ce)樣(yang)品(pin)孔中先(xian)加樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再加待測(ce)樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最終(zhong)稀釋(shi)度(du)為5倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加於酶(mei)標(biao)板孔底(di)部(bu)，盡量(liang)不觸(chu)及孔壁，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。

3. 溫育(yu)：用封板膜(mo)封板後置37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍(bei)）倍濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液用蒸餾水30（48T的20倍）倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用。

5. 洗(xi)滌(di)：小(xiao)心揭掉封板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔加滿洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)30秒(miao)後棄(qi)去，如此重(zhong)復5次(ci)，拍幹。

6. 加酶：每孔加入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔除(chu)外(wai)。

7. 溫育(yu)：操(cao)作同(tong)3。

8. 洗滌(di)：操(cao)作同(tong)5。

9. 顯色(se)：每孔先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加入(ru)顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色15分鐘(zhong).

10. 終止(zhi)：每孔加終止(zhi)液(ye)50μl，終止反(fan)應（此時(shi)藍色立(li)轉黃(huang)色(se)）。

11. 測定(ding)：以(yi)空白(bai)空調(tiao)零，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序測量各孔的(de)吸光(guang)度(du)（OD值）。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加終止(zhi)液(ye)後15分鐘(zhong)。