柱式(shi)土壤DNAout

柱式(shi)土(tu)壤DNAout
產品(pin)及(ji)特(te)點(dian) 本(ben)產(chan)品是整(zheng)合(he)天澤(ze)基(ji)因(yin)土壤(rang)DNAOUT（CAT：6070）和柱式腐殖(zhi)酸(suan)清(qing)除(chu)劑（CAT：6080）兩(liang)個(ge)產(chan)品而(er)得的柱(zhu)式(shi)升級(ji)產(chan)品(pin)。它結(jie)合了兩者的優(you)點(dian)，專門用於(yu)從各(ge)種(zhong)土(tu)壤(rang)樣品(pin)和河海沈積(ji)物(wu)中提(ti)取(qu)高(gao)質(zhi)量的DNA的試(shi)劑。跟土壤DNAOUT相(xiang)比它(ta)具有(you)下列(lie)特(te)點(dian)：
. 去(qu)汙(wu)染(ran)效果更(geng)好，得到的DNA可(ke)以直接(jie)作(zuo)為(wei)PCR模(mo)板或(huo)酶(mei)切(qie)，不需(xu)要(yao)再進(jin)行去腐(fu)殖(zhi)酸(suan)處理。
2. 操(cao)作(zuo)過(guo)程更(geng)加(jia)簡單(dan)快(kuai)速(su)，整(zheng)個(ge)操(cao)作(zuo)只需(xu)要(yao)0多分鐘(zhong)，擴容(rong)性好。
3. 產量高(gao)，每克(ke)土(tu)壤(rang)壹般(ban)可(ke)以提(ti)取(qu)到(dao)5-50 ug DNA，片段(duan)長(chang)度在20-50 Kb，OD260/280壹般(ban)都(dou)在.8以上(shang)。
4. 適(shi)合(he)於各(ge)種(zhong)土(tu)壤(rang)（包括(kuo)河海沈(chen)積物(wu)）。
規(gui)格及(ji)成分 成 份 50次包裝(zhuang)
溶液(ye)A 25 mL
溶液(ye)B 25 mL
溶液(ye)C 40 mL
離心(xin)吸附柱 50套
通用洗柱(zhu)液 50 mL
通用洗脫(tuo)液(ye) 0 mL
使(shi)用(yong)手冊 份

運輸及(ji)保(bao)存 常溫運輸及(ji)保(bao)存，保(bao)存期(qi)為(wei)壹年(nian)。
自備(bei)試(shi)劑 氯(lv)仿(fang)。
使(shi)用(yong)方法 . 65℃預熱(re)溶液(ye)A，待其沈澱溶化後充分混(hun)勻，取(qu)0.5 mL加(jia)入到(dao).5 mL塑料離心(xin)管中並放(fang)置(zhi)於(yu)65℃待用。
2. 稱取(qu)0.-0.3 g的土(tu)壤(rang)，加入(ru)到(dao)含(han)預熱(re)溶液(ye)A的離(li)心(xin)管中，震蕩(dang)器(qi)上(shang)劇烈(lie)震蕩(dang)5-0分(fen)鐘(zhong)。如果是擴量操(cao)作(zuo)，可(ke)以使用更(geng)多(duo)土(tu)壤(rang)和較大離心(xin)管。也(ye)可以將(jiang)同(tong)壹(yi)種(zhong)土(tu)壤(rang)在較大離心(xin)管中震蕩(dang)處理，然(ran)後再(zai)分到(dao).5 mL離心(xin)管中。註意(yi):不(bu)論(lun)使用(yong)大的還(hai)是小(xiao)的離(li)心(xin)管，壹(yi)定(ding)要讓(rang)管底(di)的土(tu)壤(rang)震蕩(dang)起(qi)來(lai)。
3. 將(jiang)離(li)心(xin)管置(zhi)於(yu)65℃水浴中保(bao)溫至(zhi)少(shao)5分鐘(zhong)。
4. 2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)3分鐘(zhong)，將(jiang)上(shang)清轉移到(dao)壹(yi)新(xin)離心(xin)管中（上(shang)清液(ye)壹般(ban)呈(cheng)淡(dan)黃(huang)色(se)或(huo)深棕(zong)色，實(shi)際(ji)顏(yan)色(se)取(qu)決於腐(fu)殖(zhi)酸(suan)的含(han)量(liang)，上(shang)清液(ye)的體積壹(yi)般(ban)為(wei)300-400 µL）。
5. 在上(shang)清液(ye)中加入(ru)等體積的溶液(ye)B，上(shang)下顛(dian)倒(dao)30秒充分混(hun)勻，溶液(ye)將(jiang)呈(cheng)白(bai)色或(huo)淡(dan)黃(huang)色(se)混(hun)濁(zhuo)狀。
6. 將(jiang)離(li)心(xin)管冰(bing)浴至(zhi)少(shao)5分鐘(zhong)。
7. 2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)3分鐘(zhong)，轉移上(shang)清到(dao)新的.5 mL離(li)心(xin)管中，上(shang)清液(ye)顏(yan)色(se)將(jiang)比(bi)第(di)4步(bu)得到(dao)的上(shang)清的顏(yan)色(se)稍淡(dan)，體積在0.7 mL左右。
註意(yi)：下面(mian)第(di)8-第9步(bu)的氯(lv)仿(fang)抽(chou)提(ti)操作(zuo)可(ke)以省略，直接(jie)進(jin)入第0步(bu)，但DNA的產(chan)量(liang)會(hui)低(di)50%左右，OD260/280在.7-.8。如果直接(jie)進(jin)入第0步(bu)，則轉移的溶液(ye)體積不(bu)要超過0.6 mL，否則(ze)沒(mei)有(you)空間(jian)加溶液(ye)C。
8. 加入0.2 mL的氯(lv)仿(fang)（自(zi)備(bei)），震蕩(dang)器(qi)上(shang)充分振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)混(hun)勻。註意(yi):壹(yi)定(ding)要讓(rang)管底(di)的溶液(ye)震蕩(dang)起(qi)來(lai)。
9. 2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)3分鐘(zhong)，小(xiao)心(xin)轉移上(shang)清到(dao)新離(li)心(xin)管中。說明：離心(xin)後兩(liang)相(xiang)交界面(mian)將(jiang)有(you)白(bai)色膜(mo)狀物(wu)，其中有(you)機相(xiang)部(bu)分(fen)顏(yan)色(se)較深，壹(yi)般(ban)呈(cheng)淡(dan)棕(zong)色(se)。上(shang)清的顏(yan)色(se)取(qu)決於土(tu)壤中腐殖(zhi)酸(suan)的含(han)量(liang)。將(jiang)上(shang)清轉移到(dao)新(xin)的.5 mL離(li)心(xin)管時(shi)，不(bu)要(yao)超過0.6 mL，否則(ze)沒(mei)有(you)空間(jian)加溶液(ye)C。如果有(you)多余(yu)的可(ke)以棄(qi)之不用。
0. 加入.5倍體積的溶液(ye)C，上(shang)下顛(dian)倒(dao)30秒混(hun)勻。
. 分兩次上(shang)柱（即(ji)先轉移壹(yi)半的混(hun)合(he)液到(dao)離(li)心(xin)吸附柱中，2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)半分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)穿透液，然後再(zai)將(jiang)剩下的混(hun)合(he)液到(dao)離(li)心(xin)吸附柱中，2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)半分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)穿透液）。
2. 加0.7 mL通用洗柱(zhu)液到(dao)離(li)心(xin)吸附柱中，2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)半分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)穿透液。
3. 如果有(you)必要，可(ke)以再加0.3 mL通用洗柱(zhu)液到(dao)離(li)心(xin)吸附柱中，2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)半分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)穿透液。增(zeng)加壹(yi)步(bu)洗滌(di)能(neng)使zui後得(de)到的DNA的純(chun)度稍有(you)提(ti)高(gao)，但產(chan)量(liang)稍微有(you)所(suo)降低(di)。
4. 2000-5000 g室(shi)溫再離心(xin)半分(fen)鐘(zhong)。此(ci)步(bu)十(shi)分(fen)重要，否則殘(can)留(liu)的通用洗柱(zhu)液會(hui)汙(wu)染(ran)DNA。
5. 將(jiang)離(li)心(xin)吸附柱轉移到(dao)壹(yi)新(xin)的.5 mL塑料離心(xin)管中，加入(ru)50-00 uL 通用洗脫(tuo)液(ye)。
6. 室(shi)溫放(fang)置(zhi)離(li)心(xin)吸附柱-2分鐘。
7. 2000-5000 g室(shi)溫離心(xin)半分(fen)鐘(zhong)，離心(xin)管中溶液(ye)即為(wei)DNA樣品，可(ke)以立即使(shi)用或(huo)存放(fang)於(yu)冰(bing)箱待用。