谷研(yan)試劑(ji)-人(ren),3-βD葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)（,3-βD-Glu）酶(mei)聯免(mian)疫分析(xi) 試劑(ji)盒(he)使(shi)用(yong)說(shuo)明書(shu)

谷研(yan)試劑(ji)-人(ren),3-βD葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)酶(mei)聯免(mian)疫分析(xi)  試劑(ji)盒(he)使(shi)用(yong)說(shuo)明書(shu)

本試劑(ji)盒(he)僅供研(yan)究使用(yong)。

  96T

使用(yong)目的：

本試劑(ji)盒(he)用(yong)於(yu)測(ce)定人(ren)血清、血(xue)漿及(ji)相關液(ye)體(ti)樣(yang)本中(zhong)           ,3-βD   葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)

表(biao)達。

實驗原(yuan)理(li)

本試劑(ji)盒(he)應(ying)用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾(jia)心法(fa)測定標本中(zhong)人(ren) ,3βD 葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3βDGlu)表(biao)達。用(yong)純化的

人(ren) ,3βD 葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3βDGlu)抗(kang)體(ti)包被微(wei)孔(kong)板，制(zhi)成(cheng)固(gu)相抗體(ti)，可(ke)與樣(yang)品中(zhong) ,3-βD

葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)相結(jie)合(he)，經洗滌除去(qu)未結(jie)合(he)的(de)抗(kang)原(yuan)和其(qi)他(ta)成(cheng)分後再與 HRP 標記的(de)

,3-βD   葡(pu)葡糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)，形(xing)成(cheng)抗(kang)體(ti) 抗(kang)原(yuan) 酶(mei)標抗(kang)體(ti)復(fu)合(he)物(wu)，經過*洗

滌後加底物(wu) TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶(mei)的(de)催化下轉(zhuan)化成(cheng)藍色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作用(yong)下轉(zhuan)化成(cheng)zui終(zhong)

的(de)黃(huang)色。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在 450nm 波(bo)長(chang)下測(ce)定吸光(guang)度(du)（OD 值），與 CUTOFF 值(zhi)相比(bi)較(jiao)，從(cong)而判定

標本中(zhong)人(ren) ,3-βD 葡葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)的(de)存在(zai)與否(fou)。

試劑(ji)盒(he)組成(cheng)

    30 倍濃(nong)縮(suo)洗滌液

2     酶(mei)標試劑(ji)

3     酶(mei)標包被板

4     樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)

5     顯色劑(ji) A 液(ye)

6     顯色劑(ji) B 液(ye)

標本要(yao)求(qiu)

20ml× 瓶(ping)

6ml× 瓶(ping)

2 孔(kong)×8 條(tiao)

6ml× 瓶(ping)

6ml× 瓶(ping)

6ml×/瓶(ping)

7      終(zhong)止液

8      陽(yang)性對照

9      陰(yin)性對照

0     說(shuo)明書(shu)

    封(feng)板膜(mo)

2     密封(feng)袋

6ml× 瓶(ping)

0.5ml× 瓶(ping)

0.5ml× 瓶(ping)

份(fen)

2 張

個(ge)

．標本采(cai)集(ji)後盡早(zao)進行(xing)提取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後應盡快(kuai)進行實驗。若不(bu)能

馬上進(jin)行(xing)試驗，可(ke)將標本放(fang)於(yu)20℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)

2．不能檢(jian)測(ce)含 NaN3 的樣(yang)品，因 NaN3 抑制辣(la)根(gen)過(guo)氧化物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性。

操作步驟(zhou)

.      編(bian)號(hao)：將樣(yang)品對應(ying)微(wei)孔(kong)按(an)序編號(hao)，每板應(ying)設(she)陰(yin)性對照 2 孔(kong)、陽(yang)性對照 2 孔(kong)、空(kong)白對照

孔(kong)（空(kong)白對照孔(kong)不(bu)加樣(yang)品及(ji)酶(mei)標試劑(ji)，其(qi)余各步操作相同）

2.      加(jia)樣(yang)：分別在(zai)陰(yin)、陽性對照孔(kong)中(zhong)加入(ru)陰(yin)性對照、陽(yang)性對照            50%l。然(ran)後在待測樣(yang)品孔(kong)先(xian)

加樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)                                        40%l，然(ran)後再加待(dai)測(ce)樣(yang)品    0%l。加樣(yang)將樣(yang)品加於(yu)酶(mei)標板孔(kong)底部，盡量(liang)不

觸及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混勻(yun)，

3.    溫育：用(yong)封板膜(mo)封板後置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配(pei)液(ye)：將 30 倍濃(nong)縮(suo)洗滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水 30 倍稀(xi)釋(shi)後備用(yong)

5.    洗滌：小心揭掉封(feng)板膜(mo)，棄去(qu)液體(ti)，甩(shuai)幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液，靜置(zhi) 30 秒後棄去(qu)，如(ru)此(ci)

重(zhong)復 5 次(ci)，拍幹.

6.    加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試劑(ji) 50%l，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。

7.    溫育：操(cao)作同 3。

8.    洗滌：操作同 5。

9.    顯色：每孔(kong)先(xian)加入顯色劑(ji) A50%l，再加入(ru)顯色劑(ji) B50%l，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色

5 分鐘.

0.   終(zhong)止：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止液 50%l，終(zhong)止反(fan)應（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃(huang)色）。

.   測定：以(yi)空白(bai)空調零(ling)，450nm 波(bo)長(chang)依序測量(liang)各孔(kong)的(de)吸光(guang)度(du)（OD 值）。     測(ce)定應在(zai)加終(zhong)止

液後 5 分鐘以(yi)內(nei)進(jin)行。

操作程序總結(jie)：

計(ji)算和(he)結(jie)果判定：

試驗有(you)效(xiao)性：陽性對照孔(kong)平均值≥.00;  陰(yin)性對照平均值≤0.0

臨(lin)界值(zhi)（CUT OFF）計(ji)算：臨(lin)界值(zhi)=陰性對照孔(kong)平均值+0.5

陰(yin)性判定：樣(yang)品 OD 值<  臨(lin)界值(zhi)（CUT  OFF）者(zhe)為 ,3-βD 葡(pu)葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)

陰(yin)性

陽性判定：樣(yang)品 OD 值≥  臨(lin)界值(zhi)（CUT  OFF）者(zhe)為 ,3-βD 葡(pu)葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(,3-βD-Glu)

陽(yang)性

。

註意事項(xiang)

．操作嚴格按照說(shuo)明書(shu)進(jin)行(xing)，本試劑(ji)不(bu)同(tong)批號(hao)組分不得(de)混用(yong)。

2．試劑(ji)盒(he)從(cong)冷(leng)藏環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出(chu)應在(zai)室溫平衡 530 分鐘後方可(ke)使用(yong)，酶(mei)標包被板開(kai)封(feng)後如(ru)未

用(yong)完，板條(tiao)應(ying)裝入密封(feng)袋中(zhong)保(bao)存。

3．濃(nong)洗滌液可(ke)能會(hui)有(you)結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀釋(shi)時可(ke)在水浴(yu)中(zhong)加溫助(zhu)溶，洗滌時不(bu)影響結(jie)果。

4． 封(feng)板膜(mo)只限(xian)壹次(ci)性使用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

5．底物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存。

6．試驗結(jie)果判定必須以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀數(shu)為準，使用(yong)雙波(bo)長(chang)檢(jian)測(ce)時(shi)，參考波(bo)長(chang)為 630nm

7．所(suo)有(you)樣(yang)品，洗滌液和(he)各種廢棄物(wu)都(dou)應(ying)按(an)傳(chuan)染物(wu)處理(li)。終(zhong)止液為 2M 的(de)硫(liu)酸(suan)，使(shi)用(yong)時必(bi)須

註意安全。

保(bao)存條(tiao)件及(ji)有(you)效(xiao)期(qi)

．試劑(ji)盒(he)保(bao)存：；28℃。

2．有(you)效(xiao)期(qi)：6 個(ge)月