谷研(yan)試(shi)劑-縱隔原(yuan)發性(xing)大B細(xi)胞(bao)性(xing)淋巴瘤(liu)免疫組(zu)化和(he)DNA倍體(ti)研究(jiu)

谷研(yan)試(shi)劑-縱隔原(yuan)發性(xing)大B細(xi)胞(bao)性(xing)淋巴瘤(liu)免疫組(zu)化和(he)DNA倍體(ti)研究(jiu)

摘要(yao)　目的：研究(jiu)縱隔原(yuan)發性(xing)大B細(xi)胞(bao)性(xing)淋巴瘤(liu)的臨(lin)床(chuang)病(bing)理、免疫組(zu)化及(ji)DNA倍體(ti)的表現(xian)。方法(fa)：采用(yong)常(chang)規石蠟(la)切(qie)片、HE染(ran)色及(ji)免疫組(zu)化染(ran)色ABC法(fa)。另(ling)對(dui)6 μm厚(hou)石蠟(la)切(qie)片采用(yong)Feulgen染(ran)色，應(ying)用(yong)細(xi)胞(bao)影(ying)像儀(yi)對腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)核的DNA倍體(ti)進行(xing)測定(ding)。結(jie)果(guo)：腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)特(te)點(dian)為(wei)瘤(liu)細(xi)胞(bao)較大，呈彌漫分布(bu)，其(qi)間(jian)可(ke)見(jian)寬窄(zhai)不(bu)壹(yi)、成束或帶狀(zhuang)的纖維(wei)結(jie)締組(zu)織(zhi)穿(chuan)插(cha)分割。免疫組(zu)化染(ran)色瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)LCA及(ji)L26陽(yang)性(xing)，IgA及(ji)κ弱(ruo)陽(yang)性(xing)。經(jing)細(xi)胞(bao)影(ying)像儀(yi)測定(ding)瘤(liu)細(xi)胞(bao)DNA呈高異(yi)倍體(ti)，DNA質量的分布(bu)呈高度(du)異質(zhi)性(xing)。結(jie)論(lun)：來源(yuan)於(yu)胸(xiong)腺(xian)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)。腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)DNA倍體(ti)測定(ding)結(jie)果(guo)對(dui)於(yu)患者(zhe)預(yu)後(hou)的判斷可(ke)能(neng)具(ju)有非常(chang)重要(yao)的意義(yi)。
關鍵(jian)詞(ci)　縱隔腫(zhong)瘤(liu)；淋(lin)巴瘤(liu)；DNA倍體(ti)；免疫組(zu)織(zhi)化(hua)學
中國(guo)圖(tu)書分類號　R734.5； R733.4　　文獻(xian)標(biao)識碼(ma)　A　　文章編號　00-7399（999）0-002-03

Immunohistochemistry and DNA ploidy of primary large B cell lymphoma in mediastina

Lü Xiang, Meng Fanqing, Zhou Siqiao et al
(Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing Univerisity Medical School, Nanjing　20008)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the characteristics of clinicopathology, immunohistochemistry and the DNA ploidy measurement for the primary large B cell lymphoma in mediastina. Methods　The routine paraffin slides were cut and stained with HE as well as ABC immunohistochemical technique. In addition, the 6 μm thick paraffin slides were cut and stained by Feulgen method. Then the DNA ploidy of tumor cells were measured with image cytometer. Results　The morphological characteristics of tumor cells were that the sheets of diffusely distributed large lymphocytes were penetrated by bundles of fibroconnective tissue. In immunohistochemically stained slides, the tumor cells were LCA and L26 positive, IgA and κ weakly positive. The DNA ploidy measurement results showed that the tumor cells were high aneuploidy and the distribution of DNA contents were highly heterogeneous. Conclusion　The neoplasm may originate from the B lymphocyte in thymus. The result of the DNA ploidy measurement of the tumor cells suggests that it might have very great significance for the prediction of the prognosis of the patient.
KEY WORDS　mediastina; lymphoma; DNA ploidy; immunohistochemistry

縱隔原(yuan)發性(xing)大B細(xi)胞(bao)性(xing)淋巴瘤(liu)罕見，國(guo)內鮮有報(bao)道(dao)。我們對(dui)例縱隔原(yuan)發性(xing)大B細(xi)胞(bao)性(xing)淋巴瘤(liu)進(jin)行了(le)臨(lin)床(chuang)病(bing)理、免疫組(zu)化及(ji)DNA定(ding)量測定(ding)的研究(jiu)，現報(bao)道(dao)如下。

　材(cai)料(liao)和(he)方(fang)法(fa)

標(biao)本采用(yong)0%甲醛(quan)固定(ding)，常(chang)規石蠟(la)切(qie)片，HE染(ran)色及(ji)Giemsa染(ran)色，光鏡(jing)觀察，並對(dui)石蠟(la)切(qie)片采用(yong)ABC法(fa)進(jin)行(xing)免疫組(zu)化染(ran)色。所(suo)采用(yong)的單克(ke)隆(long)抗體(ti)由Dako公(gong)司(si)提(ti)供(gong)。另(ling)對(dui)6 μm厚(hou)石蠟(la)切(qie)片采用(yong)Feulgen染(ran)色，以(yi)腫(zhong)瘤(liu)周圍(wei)殘(can)存(cun)的正常(chang)胸腺(xian)淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)作為(wei)內對照，用(yong)細(xi)胞(bao)影(ying)像儀(yi)對腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)的倍體(ti)進行(xing)測定(ding)，測定(ding)時(shi)采用(yong)的光源(yuan)波(bo)長(chang)為(wei)560 nm。

2　結(jie)果(guo)

2.　臨(lin)床(chuang)資(zi)料(liao)　患者(zhe)男(nan)，35歲(sui)，漸起(qi)幹(gan)咳3周。體(ti)檢：頸靜脈(mai)怒張，全身(shen)淺(qian)表淋(lin)巴結(jie)、肝(gan)、脾(pi)不(bu)腫(zhong)大。骨(gu)髓穿刺(ci)檢查(zha)未見(jian)異(yi)常(chang)。胸片顯示上縱隔增寬，見向兩側(ce)突(tu)起(qi)密度(du)均勻的陰(yin)影(ying)。側位(wei)片見腫(zhong)瘤(liu)位(wei)於(yu)前(qian)上縱隔。CT檢(jian)查見(jian)：前上(shang)縱隔腫(zhong)塊(kuai)大小5.5 cm×5 cm×5 cm，與周圍(wei)組(zu)織(zhi)境(jing)界模(mo)糊(hu)。手術中見(jian)腫(zhong)瘤(liu)位(wei)於(yu)胸(xiong)腺(xian)部(bu)位(wei)，表面(mian)灰白色，高(gao)低(di)不(bu)平(ping)，質(zhi)硬，與周圍(wei)組(zu)織(zhi)分界不(bu)清(qing)，廣(guang)泛(fan)浸潤(run)周圍(wei)組(zu)織(zhi)和(he)胸骨(gu)。上腔靜脈(mai)亦(yi)被包(bao)裹在腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織(zhi)內，肺組(zu)織(zhi)未見(jian)浸(jin)潤。
2.2　病(bing)理檢(jian)查(zha)　肉眼(yan)見送檢腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織(zhi)3塊(kuai)，大者(zhe)3.6 cm×2 cm×.5 cm，小(xiao)者(zhe) cm× cm× cm。表面(mian)粗糙(cao)高低(di)不(bu)平(ping)，灰(hui)白色，切(qie)面(mian)灰(hui)白色，質(zhi)硬。鏡(jing)下(xia)見：腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)呈彌漫散(san)在分布(bu)。腫(zhong)瘤(liu)內見可(ke)見(jian)寬窄(zhai)不(bu)壹(yi)、束狀(zhuang)、玻璃(li)樣變(bian)性(xing)的纖維(wei)組(zu)織(zhi)穿(chuan)插(cha)於(yu)瘤(liu)細(xi)胞(bao)之間(jian)把(ba)瘤(liu)組(zu)織(zhi)分割成不(bu)規則(ze)片塊狀(zhuang)。瘤(liu)細(xi)胞(bao)較大，大小形態較壹(yi)致。細(xi)胞(bao)核大，呈圓形(xing)、卵圓(yuan)形(xing)及(ji)略(lve)不(bu)規則(ze)形，核(he)膜清(qing)晰。核(he)染(ran)色質(zhi)呈粗顆(ke)粒(li)狀(zhuang)，核可(ke)見(jian)嗜酸性(xing)小核仁。核(he)分裂象(xiang)個/0HPF。瘤(liu)細(xi)胞(bao)胞漿(jiang)較豐(feng)富(fu)，淡(dan)伊紅(hong)色，細(xi)胞(bao)境界不(bu)清(qing)。瘤(liu)細(xi)胞(bao)間(jian)可(ke)見(jian)少(shao)數不(bu)規則(ze)分布(bu)的小血管。Giemsa染(ran)色瘤(liu)細(xi)胞(bao)漿呈紫(zi)藍色，胞(bao)漿(jiang)內未見(jian)顆(ke)粒(li)。腫(zhong)瘤(liu)內可(ke)見(jian)大片壞死，在腫(zhong)瘤(liu)的邊(bian)緣(yuan)可(ke)見(jian)瘤(liu)細(xi)胞(bao)浸潤(run)周圍(wei)脂(zhi)肪(fang)結(jie)締組(zu)織(zhi)，並(bing)可(ke)見(jian)少(shao)量萎縮的胸腺(xian)組(zu)織(zhi)。
2.3　免疫組(zu)化　瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)LCA陽性(xing)、L26陽性(xing)、IgA及(ji)κ弱(ruo)陽(yang)性(xing)。瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)IgM、IgG、λ、UCHL、Mac387、cytokeratin、vimentin及(ji)p53陰(yin)性(xing)。
2.4　腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)DNA定(ding)量測定(ding)　腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)呈高異(yi)倍體(ti)，DNA質量的分布(bu)呈高度(du)異質(zhi)性(xing)。瘤(liu)細(xi)胞(bao)DNA質量主峰(feng)值為(wei)7.95 pg，DNA指數(shu)為(wei)2.50，變(bian)異(yi)系數(shu)0.22；瘤(liu)細(xi)胞(bao)DNA質量次峰值為(wei)9.68 pg，DNA指數(shu)為(wei).35，變(bian)異(yi)系數(shu)為(wei)0.55。

3　討論(lun)

縱隔內原(yuan)發性(xing)淋巴瘤(liu)罕見，其(qi)大多數為(wei)淋巴(ba)母細(xi)胞(bao)型淋(lin)巴瘤(liu)〔〕，而原(yuan)發性(xing)大B細(xi)胞(bao)性(xing)淋巴瘤(liu)則(ze)極(ji)少(shao)見。其(qi)臨(lin)床(chuang)特(te)點(dian)為(wei)：患者(zhe)以(yi)年(nian)輕(qing)女性(xing)多見〔2〕，發(fa)病(bing)年齡(ling)23～75歲(sui)，平(ping)均(jun)33歲(sui)〔〕。患者(zhe)可(ke)有咳嗽、胸痛、呼(hu)吸(xi)困難(nan)以及(ji)靜脈(mai)阻(zu)塞(sai)綜(zong)合(he)征(zheng)等。腫(zhong)瘤(liu)位(wei)於(yu)前(qian)縱隔，並(bing)傾向於(yu)浸(jin)潤周圍(wei)組(zu)織(zhi)。本(ben)例臨(lin)床(chuang)表現(xian)及(ji)生(sheng)物學行為(wei)特(te)點(dian)均與文(wen)獻(xian)報(bao)道(dao)壹(yi)致。
本(ben)例腫(zhong)瘤(liu)在光鏡(jing)下(xia)zui顯著的特(te)點(dian)為(wei)：瘤(liu)細(xi)胞(bao)較大，形態壹(yi)致，呈彌漫散(san)在分布(bu)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)間(jian)常(chang)有寬窄(zhai)不(bu)壹(yi)、硬化(hua)的纖維(wei)組(zu)織(zhi)束(shu)帶穿插(cha)分割。細(xi)胞(bao)核呈圓形(xing)、卵圓(yuan)形(xing)及(ji)不(bu)規則(ze)形，核(he)仁圓(yuan)而清(qing)楚，細(xi)胞(bao)漿較豐(feng)富(fu)，弱嗜堿(jian)性(xing)。腫(zhong)瘤(liu)內常(chang)見壞死，核(he)分裂象(xiang)可(ke)達(da)～4個(ge)/HPF。Kurita等(deng)〔3〕報(bao)道(dao)腫(zhong)瘤(liu)印(yin)片May-Giemsa染(ran)色在大多數瘤(liu)細(xi)胞(bao)胞漿(jiang)內可(ke)見(jian)嗜苯(ben)胺(an)藍顆(ke)粒(li)。電(dian)鏡(jing)下(xia)的特(te)點(dian)為(wei)瘤(liu)細(xi)胞(bao)胞漿(jiang)豐富，含有壹(yi)些(xie)線(xian)粒(li)體(ti)、核糖(tang)體(ti)和少(shao)量粗面(mian)內質網。大多數瘤(liu)細(xi)胞(bao)胞漿(jiang)內含中等大小的(直(zhi)徑(jing)<0.7 μm)有膜包(bao)裹的電(dian)子致密顆(ke)粒(li)。在壹(yi)些(xie)細(xi)胞(bao)內可(ke)見(jian)較大的有膜包(bao)裹的電(dian)子透明(ming)顆(ke)粒(li)。由於(yu)其(qi)電(dian)子致密顆(ke)粒(li)形態(tai)類似(si)於(yu)大顆(ke)粒(li)淋巴(ba)細(xi)胞(bao)及(ji)大顆(ke)粒(li)淋巴(ba)細(xi)胞(bao)白血病(bing)/淋巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞(bao)內的溶酶(mei)體(ti)，故(gu)Kurita認(ren)為(wei)嗜苯(ben)胺(an)藍顆(ke)粒(li)可(ke)能(neng)來(lai)源(yuan)於(yu)溶酶(mei)體(ti)。
關於(yu)該腫(zhong)瘤(liu)的起(qi)源(yuan)，目前(qian)多認(ren)為(wei)其(qi)可(ke)能(neng)來(lai)源(yuan)於(yu)胸(xiong)腺(xian)內B淋巴細(xi)胞(bao)〔2，3〕。胸腺(xian)髓質內B淋巴細(xi)胞(bao)可(ke)陽(yang)性(xing)表達(da)所(suo)有B淋巴細(xi)胞(bao)標(biao)記，並可(ke)表達(da)IgM、IgD陽性(xing)，偶而IgA陽性(xing)，但(dan)IgG陰(yin)性(xing)。Kurita等的病(bing)例瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)CD20、CD22、CD23、CD24、OKDR和PCA陽(yang)性(xing)，CD9和CD20陰(yin)性(xing)，說明其(qi)來源(yuan)於(yu)胸(xiong)腺(xian)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)。文獻(xian)報(bao)道(dao)由於(yu)瘤(liu)細(xi)胞(bao)可(ke)表達(da)漿細(xi)胞(bao)抗原(yuan)標(biao)記PC和PCA陽性(xing)，提(ti)示其(qi)為(wei)向B細(xi)胞(bao)分化的終末細(xi)胞(bao)〔2，3〕。本例腫(zhong)瘤(liu)位(wei)於(yu)胸(xiong)腺(xian)部(bu)位(wei)，周圍(wei)可(ke)見(jian)殘(can)留的胸腺(xian)組(zu)織(zhi)，免疫組(zu)化染(ran)色瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)B淋巴(ba)細(xi)胞(bao)標(biao)記陽性(xing)，支持其(qi)起(qi)源(yuan)於(yu)胸(xiong)腺(xian)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)。
鑒(jian)別診(zhen)斷：()霍奇(qi)金病(bing)：其(qi)雖(sui)以女性(xing)青年多見且(qie)多為(wei)結(jie)節硬化(hua)型(xing)，但(dan)其(qi)有典型的雙核(he)R-S細(xi)胞(bao)及(ji)其(qi)它(ta)各(ge)型R-S細(xi)胞(bao)，背景細(xi)胞(bao)多樣化，有較多的反應性(xing)淋巴細(xi)胞(bao)及(ji)組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)，免疫組(zu)化染(ran)色瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)Leu-M及(ji)Ki-陽(yang)性(xing)。本例腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)形態(tai)較單(dan)壹(yi)，不(bu)見以(yi)診(zhen)斷性(xing)R-S細(xi)胞(bao)為(wei)代表的系列(lie)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)。瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)B淋巴(ba)細(xi)胞(bao)標(biao)記陽性(xing)。(2)胸腺(xian)瘤(liu)：有上皮(pi)細(xi)胞(bao)及(ji)淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)兩種(zhong)細(xi)胞(bao)成分，上皮(pi)性(xing)細(xi)胞(bao)形態(tai)多樣，可(ke)呈梭形(xing)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)可(ke)表達(da)keratin、Leu-7和CEA陽(yang)性(xing)及(ji)thymulin和(he)thymosin α陽(yang)性(xing)。本例腫(zhong)瘤(liu)只見(jian)單(dan)壹(yi)細(xi)胞(bao)成分，不(bu)見梭(suo)形細(xi)胞(bao)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)呈彌漫散(san)在分布(bu)，無排(pai)列(lie)成(cheng)巢(chao)的趨勢，瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)上皮(pi)性(xing)標(biao)記陰(yin)性(xing)。(3)精原(yuan)細(xi)胞(bao)瘤(liu)：其(qi)好發於(yu)男(nan)性(xing)，男(nan)女之比(bi)5∶。瘤(liu)細(xi)胞(bao)胞境(jing)界清(qing)楚，核仁大而明顯，可(ke)排(pai)列(lie)成(cheng)小(xiao)巢(chao)狀(zhuang)或不(bu)規則(ze)腺(xian)泡(pao)狀(zhuang)及(ji)梁(liang)索狀(zhuang)，間(jian)質內淋巴細(xi)胞(bao)浸潤(run)較明(ming)顯，可(ke)見(jian)上(shang)皮(pi)樣肉芽腫(zhong)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)胎盤(pan)堿性(xing)磷(lin)酸酶(mei)、Leu-7陽性(xing)。本例腫(zhong)瘤(liu)則(ze)以女性(xing)多見，瘤(liu)細(xi)胞(bao)呈彌漫散(san)在分布(bu)，核(he)仁較小(xiao)而細(xi)胞(bao)境界不(bu)清(qing)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)B淋巴(ba)細(xi)胞(bao)標(biao)記陽性(xing)。(4)間(jian)變(bian)性(xing)大細(xi)胞(bao)淋巴(ba)瘤(liu)：70%的間(jian)變(bian)性(xing)大細(xi)胞(bao)淋巴(ba)瘤(liu)可(ke)累(lei)及(ji)縱隔〔4〕，其(qi)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)形態(tai)多樣化，常(chang)有花冠(guan)狀(zhuang)多核巨(ju)細(xi)胞(bao)、胚(pei)胎(tai)樣巨核(he)細(xi)胞(bao)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)CD30(Ki-或HerH2)陽性(xing)。本例腫(zhong)瘤(liu)形(xing)態較單(dan)壹(yi)，不(bu)見花(hua)冠(guan)狀(zhuang)巨核(he)細(xi)胞(bao)和胚(pei)胎(tai)樣巨核(he)細(xi)胞(bao)，瘤(liu)細(xi)胞(bao)表達(da)CD30(Ki-或HerH2)陰(yin)性(xing)。
本例腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)DNA呈高異(yi)倍體(ti)，DNA質量的分布(bu)呈高度(du)異質(zhi)性(xing)。DNA質量主峰(feng)值為(wei)7.95 pg，DNA指數(shu)為(wei)2.50，次峰值為(wei)9.68 pg， DNA指數(shu)為(wei).35，手術時(shi)見腫(zhong)瘤(liu)在縱隔內廣(guang)泛(fan)浸潤(run)性(xing)生長(chang)並浸潤(run)胸(xiong)骨(gu)，反映(ying)了(le)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)呈高度(du)惡(e)性(xing)。文獻(xian)亦(yi)報(bao)道(dao)該腫(zhong)瘤(liu)預(yu)後(hou)差(cha)〔〕，大多數病(bing)例抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)治療(liao)效(xiao)果(guo)不(bu)佳(jia)。患者(zhe)存(cun)活時(shi)間(jian)4～22個月，平(ping)均(jun)僅存(cun)活6個月〔2〕。該腫(zhong)瘤(liu)的治療(liao)以為(wei)主，Lavabre-Bertrand等(deng)認(ren)為(wei)，盡(jin)管(guan)在開始階(jie)段(duan)就(jiu)應(ying)對(dui)腫(zhong)瘤(liu)進(jin)行積(ji)極(ji)的，然而放射(she)治療(liao)或手術治療(liao)亦(yi)屬(shu)必要(yao)，因(yin)為(wei)腫(zhong)瘤(liu)可(ke)較長(chang)時(shi)間(jian)內僅局(ju)部(bu)發展〔〕。