谷研試(shi)劑(ji)-常(chang)用(yong)佐(zuo)劑(ji)的(de)種類和(he)制(zhi)備(bei)

                         谷研試(shi)劑(ji)-常(chang)用(yong)佐(zuo)劑(ji)的(de)種類和(he)制(zhi)備(bei)

佐(zuo)劑(ji)主(zhu)要(yao)可(ke)分(fen)為(wei)兩種(zhong)：壹種本(ben)身(shen)具有免疫原(yuan)性，如百日(ri)咳桿菌(jun)、抗酸(suan)桿菌(jun)（結(jie)核(he)分(fen)枝桿菌(jun)）以(yi)及(ji)革蘭(lan)陰(yin)性桿菌(jun)等(deng)；另(ling)壹種本(ben)身(shen)無免疫原(yuan)性，如、磷(lin)酸(suan)鈣、礦(kuang)物油乳(ru)劑(ji)、表面活(huo)性劑(ji)等(deng)。目前(qian)應用(yong)zui多的(de)是弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)(Freund adjuvant)。
    ．弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji) 弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)是目前(qian)動物實驗中(zhong)zui常(chang)用(yong)的佐(zuo)劑(ji)，分(fen)為(wei)不(bu)*弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)和(he)*弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)。不(bu)*弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)是液體石蠟(la)與羊(yang)毛(mao)脂(zhi)混(hun)合(he)而(er)成(cheng)，組分比為(wei)～5：，可(ke)根(gen)據(ju)需要(yao)而(er)定(ding)，通常(chang)為(wei)2：。不(bu)*佐(zuo)劑(ji)中(zhong)加(jia)卡(ka)介(jie)苗(miao)(zui終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei)2～20mg/ml)或(huo)死的結(jie)核(he)分(fen)枝桿菌(jun)，即為(wei)*弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)。上述佐(zuo)劑(ji)經(jing)高壓(ya)滅菌後(hou)，低(di)溫(wen)保(bao)存(cun)備(bei)用(yong)。 
    在(zai)免疫動物前(qian)，先將(jiang)弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)與抗原(yuan)按壹定比例(li)混(hun)合(he)，制(zhi)備(bei)成 "油包水(shui)"乳(ru)狀液(ye)。佐(zuo)劑(ji)和(he)抗原(yuan)體積(ji)比壹般(ban)為(wei)：。佐(zuo)劑(ji)與抗原(yuan)乳(ru)化(hua)可(ke)按如(ru)下(xia)方法(fa)進行：
  （） 研磨法(fa)：先將(jiang)佐(zuo)劑(ji)加(jia)熱並(bing)取(qu)適量放入無菌(jun)的玻(bo)璃研缽內(nei)，待(dai)冷卻(que)後(hou)再(zai)緩緩(huan)滴入等(deng)體積(ji)的(de)抗原(yuan)溶(rong)液(ye)，邊滴邊按同(tong)壹方向研磨，滴加抗原(yuan)的速度(du)要(yao)慢(man)。待抗原(yuan)全(quan)部(bu)加入後(hou)，繼(ji)續研磨壹段(duan)時間，使之(zhi)成為(wei)乳(ru)白色粘(zhan)稠(chou)的(de)油包水(shui)乳(ru)劑(ji)。本(ben)法(fa)適於制(zhi)備(bei)大量的佐(zuo)劑(ji)抗原(yuan)，缺點(dian)是研缽壁上粘(zhan)附大量乳(ru)劑(ji)，抗原(yuan)損失較大。 
  （2） 註(zhu)射器(qi)混(hun)合(he)法(fa)：將(jiang)等(deng)量的弗(fu)氏佐(zuo)劑(ji)和(he)抗原(yuan)溶(rong)液(ye)分別吸(xi)入兩個(ge)註(zhu)射器(qi)內(nei)，兩註(zhu)射器(qi)之(zhi)間以(yi)壹細(xi)膠(jiao)管(guan)相(xiang)連，註意(yi)排(pai)凈(jing)空(kong)氣，然後(hou)交(jiao)替推動針(zhen)管(guan)，直(zhi)至(zhi)形(xing)成(cheng)粘(zhan)稠(chou)的(de)乳(ru)劑(ji)為(wei)止。本(ben)法(fa)優點是容易(yi)做(zuo)到無(wu)菌操作，適(shi)用(yong)於制(zhi)備(bei)少量的抗原(yuan)乳(ru)劑(ji)。 制(zhi)備(bei)好的(de)乳(ru)化(hua)劑(ji)經(jing)鑒定才能(neng)適(shi)用(yong)。鑒定(ding)方法(fa)是將(jiang)乳(ru)化(hua)劑(ji)滴入冷水(shui)中(zhong)，若(ruo)保(bao)持完整不(bu)分(fen)散(san)，成(cheng)滴狀浮(fu)於水面，即乳(ru)化(hua)*，為(wei)合(he)格的(de)油包水(shui)劑(ji)。
    2．佐(zuo)劑(ji) 取(qu)5%硫(liu)酸鋁(lv)溶(rong)液(ye)250ml，在(zai)強(qiang)烈(lie)攪(jiao)拌下(xia)加入(ru)5%氫氧化鈉溶(rong)液(ye)00ml，用(yong)生理鹽(yan)水離心(xin)洗滌沈澱(dian)2次(ci)，再(zai)懸入(ru)生理鹽(yan)水中(zhong)使(shi)達250ml。免疫接種(zhong)時，取(qu)適量佐(zuo)劑(ji)加(jia)等體積(ji)抗原(yuan)即可(ke)免疫。 
    3．明(ming)礬(fan)佐(zuo)劑(ji) 鉀(jia)鋁(lv)礬(硫(liu)酸鋁(lv)鉀(jia))在(zai)壹定pH條(tiao)件下(xia)產生膠(jiao)體吸(xi)附抗原(yuan)而(er)產(chan)生佐(zuo)劑(ji)效應。制(zhi)備(bei)方法(fa)是用(yong)生理鹽(yan)水溶(rong)解(jie)蛋(dan)白質(zhi)抗原(yuan)，在(zai)攪拌下(xia)緩慢(man)滴入壹定量0%硫(liu)酸鋁(lv)鉀(jia)溶(rong)液(ye)，用(yong)NaOH調pH到6．5，此(ci)時溶(rong)液(ye)變(bian)成(cheng)乳(ru)狀懸(xuan)液(ye)，離心(xin)後(hou)去掉(diao)上清(qing)液，沈(chen)澱(dian)用(yong)生理鹽(yan)水洗滌二次(ci)，加入(ru)硫(liu)柳(liu)汞防腐(fu)，4℃保(bao)存(cun)備(bei)用(yong)。明礬(fan)佐(zuo)劑(ji)壹般(ban)用(yong)於肌肉(rou)註(zhu)射，皮(pi)下(xia)註射容(rong)易(yi)引起肉芽(ya)腫和(he)膿(nong)腫。 
    4．脂(zhi)質(zhi)體 脂質(zhi)體包封抗原(yuan)後(hou)，可(ke)使(shi)抗原(yuan)延緩(huan)釋(shi)放，並(bing)且脂(zhi)質(zhi)體顆粒(li)有刺激(ji)機(ji)體免疫反(fan)應(ying)的作用(yong)。因此(ci)，用(yong)脂質(zhi)體包封的抗原(yuan)免疫動物可(ke)提(ti)高免疫效果。