蛋(dan)白腖細胞(bao)培養(yang)基基本(ben)配方(fang)構(gou)成及(ji)血清(qing)在其中的(de)地位

蛋(dan)白腖細胞(bao)培養(yang)基基本(ben)配方(fang)構(gou)成及(ji)血清(qing)在其中的(de)地位

無(wu)血清(qing)蛋(dan)白腖培養基的(de)基本(ben)配方(fang)：基本(ben)成分(fen)為基礎培養基及添加組(zu)分(fen)兩(liang)大(da)部(bu)分(fen)。

　　用於生(sheng)物(wu)制(zhi)藥和疫苗的(de)細(xi)胞(bao)在體外培(pei)養(yang)時(shi)，多數(shu)呈(cheng)貼(tie)壁(bi)生(sheng)長或兼(jian)性(xing)貼(tie)壁(bi)生(sheng)長；而(er)當其(qi)在無(wu)血清(qing)、無(wu)蛋(dan)白培養基中生(sheng)長時(shi)，由(you)於(yu)缺乏血清中的(de)各(ge)種(zhong)粘附貼(tie)壁因子如(ru)纖粘連(lian)蛋(dan)白、層粘連(lian)蛋(dan)白、膠原(yuan)、玻表粘連(lian)蛋(dan)白，細胞(bao)往往以(yi)懸浮(fu)形(xing)式生長。

　　添(tian)加組(zu)分(fen)包括以(yi)下(xia)幾大(da)類(lei)物質(zhi)

　　()促(cu)貼壁(bi)物(wu)質(zhi)：許(xu)多(duo)細(xi)胞(bao)必須貼壁(bi)才(cai)能生長，這種情(qing)況(kuang)下(xia)無(wu)血清(qing)培(pei)養基中壹定(ding)要(yao)添(tian)加促(cu)貼壁(bi)和(he)擴展因(yin)子，壹般(ban)為細(xi)胞(bao)外基質(zhi)，如纖連(lian)蛋(dan)白、層粘連(lian)蛋(dan)白等。它們還(hai)是(shi)重(zhong)要(yao)的(de)分(fen)裂(lie)素(su)以(yi)及維(wei)持(chi)正(zheng)常(chang)細胞(bao)功能(neng)的(de)分(fen)化因子，對(dui)許(xu)多(duo)細(xi)胞(bao)的(de)繁(fan)殖(zhi)和分(fen)化，起著重(zhong)要(yao)作用。纖連(lian)蛋(dan)白主要(yao)促(cu)進來自(zi)中胚層細(xi)胞(bao)的(de)貼(tie)壁與分化，這些細(xi)胞(bao)培養(yang)基包括成纖維細(xi)胞(bao)、肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao)、粒(li)細胞(bao)、腎上(shang)皮(pi)細胞(bao)、腎上(shang)腺(xian)皮(pi)質(zhi)細胞(bao)、CHO細胞(bao)、成肌(ji)細(xi)胞(bao)等。

　　(2)促(cu)生長因(yin)子及(ji)激(ji)素(su)：針對(dui)不同細胞(bao)添加不同的(de)生(sheng)長因(yin)子。激(ji)素(su)也(ye)是刺(ci)激細(xi)胞(bao)生長、維(wei)持(chi)細(xi)胞(bao)功能(neng)的(de)重(zhong)要(yao)物(wu)質(zhi)，有些(xie)激素(su)是許(xu)多(duo)細(xi)胞(bao)*的(de)，如(ru)胰(yi)島(dao)素(su)。

　　(3)酶抑(yi)制(zhi)劑：培(pei)養(yang)貼壁(bi)生(sheng)長的(de)細(xi)胞(bao)，需要(yao)用消(xiao)化傳代(dai)，在無(wu)血清(qing)培(pei)養基中*須含酶抑制(zhi)劑，以(yi)終止(zhi)酶(mei)的(de)消(xiao)化作用，達到(dao)保(bao)護細(xi)胞(bao)的(de)目(mu)的(de)。zui常(chang)用的(de)是(shi)大豆；抑制(zhi)劑。

　　(4)結(jie)合(he)蛋(dan)白腖和轉運(yun)蛋(dan)白：常(chang)見如轉(zhuan)鐵蛋(dan)白和牛血(xue)清白蛋(dan)白。牛血清(qing)白蛋(dan)白的(de)添(tian)加比較(jiao)大，可增(zeng)加培養基的(de)粘(zhan)度，保(bao)護細(xi)胞(bao)免(mian)受(shou)機械損傷(shang)。許(xu)多(duo)旋(xuan)轉式培養的(de)無(wu)血清(qing)培(pei)養基都含有牛血(xue)清(qing)白蛋(dan)白。

　　(5)微(wei)量元(yuan)素(su)：硒是(shi)zui常(chang)見的(de)。

    目(mu)前，血清仍是(shi)動物(wu)蛋(dan)白腖細胞(bao)培養(yang)中zui基本(ben)的(de)的(de)添(tian)加物，尤其是(shi)在原代(dai)培(pei)養或者細胞(bao)生長狀況(kuang)不良時(shi)，常(chang)常(chang)會先使用有血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養液進行(xing)培養(yang)，待細(xi)胞(bao)生長旺(wang)盛以(yi)後(hou)，再(zai)換(huan)成無(wu)血清(qing)培(pei)養液(ye)。細胞(bao)轉入(ru)無(wu)血清(qing)培(pei)養基培養要(yao)有(you)壹個(ge)適(shi)應(ying)過程，壹般(ban)要(yao)逐(zhu)步降(jiang)低(di)血清濃度，從0%減少(shao)到(dao)5%，3%，%，直至無(wu)血清(qing)培(pei)養。

　　在降(jiang)低(di)過程中要(yao)註(zhu)意(yi)觀察(cha)細胞(bao)培養(yang)基形(xing)態是否發生(sheng)變(bian)化，是否有部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)死亡(wang)，存活細胞(bao)是否還(hai)保(bao)持(chi)原(yuan)有的(de)功(gong)能和生物(wu)學(xue)特性(xing)等。在實(shi)驗(yan)後(hou)這些細(xi)胞(bao)壹般(ban)不再(zai)繼(ji)續(xu)保(bao)留，很(hen)少(shao)有(you)細(xi)胞(bao)能夠培養(yang)於(yu)無(wu)血清(qing)培(pei)養基而不發生(sheng)改變(bian)的(de)。細(xi)胞(bao)轉入(ru)無(wu)血清(qing)培(pei)養之前，要(yao)留(liu)有種(zhong)子細(xi)胞(bao)，種子細(xi)胞(bao)按(an)常(chang)規培養(yang)於含血清的(de)培(pei)養基中，以(yi)保(bao)證細胞(bao)的(de)特性(xing)不發生(sheng)變化。

　　為了(le)使(shi)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)無(wu)血清(qing)培(pei)養，關鍵(jian)的(de)是(shi)使所培養(yang)細(xi)胞(bao)：、處於對(dui)數生(sheng)長中期，2、大於(yu)90% 活細胞(bao)率，3、適(shi)應(ying)時(shi)以(yi)較(jiao)高(gao)的(de)起始細胞(bao)接種(zhong)。