培養(yang)基(ji)介紹細(xi)胞復(fu)蘇(su)需要(yao)註意(yi)的事(shi)項(xiang)

培養(yang)基(ji)介紹細(xi)胞復(fu)蘇(su)需要(yao)註意(yi)的事(shi)項(xiang)

　　. 培養(yang)基(ji)取細(xi)胞的過(guo)程(cheng)中(zhong)註意(yi)帶好防凍手套，護(hu)目(mu)鏡。此(ci)項(xiang)尤為重(zhong)要(yao)，細(xi)胞凍存管可(ke)能漏入液(ye)氮，解(jie)凍時(shi)凍存管中(zhong)的(de)氣溫(wen)急劇上(shang)升，可(ke)導(dao)致(zhi)爆(bao)炸(zha)。

　　2. 凍存液的(de)問題：凍存液的(de)配置已(yi)是常(chang)識，在(zai)這(zhe)裏(li)不(bu)作(zuo)詳述，但(dan)二甲(jia)基(ji)亞碸(feng)（DMSO）對(dui)細(xi)胞不(bu)是(shi)*無毒副作(zuo)用(yong)，在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)，二甲(jia)基(ji)亞碸(feng)對(dui)細(xi)胞的毒副作(zuo)較大(da)，因(yin)此(ci)，必須(xu)在(zai)-2min內(nei)使(shi)凍存液*融(rong)化(hua)。如(ru)果(guo)復(fu)蘇(su)溫(wen)度(du)太慢，會造成(cheng)細(xi)胞的損(sun)傷(shang)，二甲(jia)基(ji)亞碸(feng)（DMSO）選擇(ze)進(jin)口產(chan)品(pin)。

　　3. 離心(xin)前(qian)須(xu)加(jia)入少量培養(yang)液。細(xi)胞解(jie)凍後(hou)二(er)甲(jia)基(ji)亞碸(feng)濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，註意(yi)加(jia)入少量培養(yang)液可(ke)稀釋其(qi)濃(nong)度(du)，以減(jian)少對(dui)細(xi)胞的損(sun)傷(shang)。

　　4. 離心(xin)問(wen)題：目(mu)前(qian)主(zhu)要(yao)有兩種見(jian)解(jie)。壹種是(shi)解(jie)凍後(hou)的(de)細(xi)胞培養(yang)基(ji)懸液(ye)直(zhi)接吹打均勻(yun)後(hou)分(fen)裝到(dao)培養(yang)瓶中進(jin)行培養(yang)，第二天換(huan)液。因(yin)為離(li)心(xin)的(de)目(mu)的是(shi)兩個(ge)，去除DMSO，去除死(si)細(xi)胞，這個(ge)是標準流(liu)程(cheng)，但(dan)對(dui)壹般(ban)人來(lai)說(shuo)，把握(wo)不(bu)好(hao)離心(xin)轉(zhuan)速(su)和時(shi)間，轉的(de)不(bu)夠(gou)活細(xi)胞沈底(di)的少，細(xi)胞就全(quan)被扔(reng)掉(diao)了(le)，轉(zhuan)過(guo)了(le)活(huo)細(xi)胞會受壓過大，死(si)亡(wang)。此(ci)外(wai)在(zai)操(cao)作過(guo)程(cheng)中(zhong)容易(yi)汙染，所(suo)以不(bu)。另(ling)壹種說(shuo)法為細(xi)胞懸液(ye)中(zhong)含(han)有二(er)甲(jia)基(ji)亞碸(feng)（DMSO），DMSO對(dui)細(xi)胞有壹定(ding)的(de)毒副作(zuo)用(yong)，所(suo)以須(xu)將離心(xin)後(hou)的(de)液體前(qian)倒凈，且(qie)壹定(ding)倒幹(gan)凈。我(wo)在(zai)試(shi)驗(yan)中按照(zhao)常(chang)規的(de)離心(xin)分(fen)裝的(de)方(fang)法進(jin)行復(fu)蘇(su)，結果(guo)無有異(yi)常。

　　5. 細(xi)胞貼(tie)壁(bi)少的問(wen)題：教科(ke)書中說明(ming)凍存細(xi)胞解(jie)凍時(shi)ml細(xi)胞液要(yao)加(jia)0ml－5m培養(yang)液，而在(zai)我(wo)的(de)試(shi)驗(yan)中(zhong)的經驗總(zong)結為培養(yang)基(ji)越少細(xi)胞越容(rong)易(yi)貼(tie)附(fu)。

　　6. 復(fu)蘇(su)細(xi)胞分(fen)裝的(de)問(wen)題：試驗(yan)中我(wo)的(de)經驗總(zong)結為復(fu)蘇(su)管細(xi)胞壹般(ban)可(ke)分(fen)裝到(dao)-2只培養(yang)瓶中，分(fen)裝過(guo)多，細(xi)胞濃(nong)度(du)過(guo)低(di)，不(bu)利(li)於細(xi)胞的貼(tie)壁(bi)。

　　7. 加(jia)培養(yang)基(ji)的量(liang)放(fang)入問(wen)題：這個(ge)量的(de)多少的把握(wo)主要(yao)涉及(ji)到(dao)的(de)問題是DMSO的(de)濃(nong)度(du)，從如(ru)果妳加(jia)培養(yang)基(ji)的太少，那麽DMSO的(de)濃(nong)度(du)就(jiu)會比較大，就會影響細(xi)胞生長，從以前(qian)的(de)資(zi)料(liao)來看，DMSO的(de)濃(nong)度(du)在(zai)小(xiao)於0.5%的(de)時(shi)候對(dui)壹般(ban)細(xi)胞沒有什麽影(ying)響，還(hai)有壹個(ge)說法是％。所(suo)以如(ru)果妳的凍存液的(de)濃(nong)度(du)是(shi)0％DMSO的(de)話(hua)那麽加(jia)0ml以上(shang)的培養(yang)基(ji)就恰好稀釋到(dao)了(le)無(wu)害(hai)濃(nong)度(du)。