大鼠（Glutamate）ELISA試劑盒操作(zuo)說明(ming)

大鼠（Glutamate）ELISA試劑盒操作(zuo)說明(ming)

ELISA試劑盒試驗(yan)原(yuan)理(li)：

    Glutamate試劑盒是固(gu)相(xiang)夾心(xin)法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)實(shi)驗(yan)（ELISA）.已(yi)知(zhi)Glutamate濃度(du)的(de)標準品、未知(zhi)濃度(du)的(de)樣品加入微(wei)孔酶(mei)標板內進行檢測。先(xian)將(jiang)Glutamate和標記的抗體(ti)同(tong)時(shi)溫(wen)育(yu)。洗(xi)滌(di)後(hou)，加入親和素(su)標記過的(de)HRP。再(zai)經(jing)過溫(wen)育(yu)和洗(xi)滌(di)，去除(chu)未結(jie)合的(de)酶(mei)結(jie)合物(wu)，然(ran)後(hou)加入底物A、B，和酶(mei)結(jie)合物(wu)同(tong)時(shi)作(zuo)用。產(chan)生顏(yan)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺(qian)和樣品中Glutamate的(de)濃度(du)呈比例(li)關系(xi)。

試劑盒內容(rong)及其配制

試劑盒成份（2-8℃保(bao)存(cun)） 96孔配置(zhi) 48孔配置(zhi) 配制
96/48人(ren)份酶(mei)標板 塊(kuai)板(ban)（96T） 半(ban)塊(kuai)板(ban)（48T） 即(ji)用型
塑(su)料膜板蓋 塊(kuai) 半(ban)塊(kuai) 即(ji)用(yong)型
標準品：800umol/L 瓶（0.6ml） 瓶（0.3ml） 按(an)說明(ming)書(shu)進行稀稀
空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao) 瓶（.0ml） 瓶（0.5ml） 即(ji)用型
標準品稀釋(shi)緩沖(chong)液(ye) 瓶（4.0ml） 瓶（2.0ml） 即(ji)用型
標記的抗Glutamate抗體(ti) 瓶（6.0ml） 瓶（3.0ml） 即(ji)用型
親(qin)和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP 瓶（8.0ml） 瓶（4.0ml） 即(ji)用型
洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye) 瓶（20ml） 瓶（0ml） 按(an)說明(ming)書(shu)進行稀釋
底(di)物A 瓶（6.0ml） 瓶（3.0ml） 即(ji)用型
底(di)物B 瓶（6.0ml） 瓶（3.0ml） 即(ji)用型
終(zhong)止液(ye) 瓶（6.0ml） 瓶（3.0ml） 即(ji)用型
標本(ben)稀釋(shi)液(ye) 瓶（2ml） 瓶（6.0ml） 即(ji)用型

自備(bei)材料

． 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

2． 加樣器(qi)：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。

3． 振(zhen)蕩器(qi)及磁(ci)力攪(jiao)拌器(qi)等(deng)。

ELISA試劑盒安全(quan)性

． 避(bi)免(mian)直(zhi)接接觸(chu)終(zhong)止液(ye)和底(di)物(wu)A、B。壹旦(dan)接觸(chu)到(dao)這些液(ye)體(ti)，請盡快用(yong)水(shui)沖(chong)洗(xi)。

2． 實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)要(yao)吃喝(he)、抽煙(yan)或(huo)使(shi)用化(hua)妝品。

3． 不要(yao)用嘴吸取試劑盒裏的(de)任(ren)何成(cheng)份。

操作(zuo)註意(yi)事(shi)項

． 試劑應按標簽說明(ming)書(shu)儲存(cun)，使(shi)用前(qian)恢復到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的(de)標準品應丟棄(qi)，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)。

2． 實驗(yan)中(zhong)不(bu)用(yong)的(de)板條應立即(ji)放回包(bao)裝(zhuang)袋中，密(mi)封保(bao)存(cun)，以免變質。

3． 不(bu)用(yong)的其它(ta)試劑應包裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋好(hao)。不(bu)同批(pi)號的試劑不要(yao)混用。保(bao)質前(qian)使(shi)用。

4． 使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)吸(xi)頭以免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染，吸(xi)取終止液(ye)和底(di)物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避(bi)免(mian)使(shi)用帶(dai)金(jin)屬部分的(de)加樣器(qi)。

5． 使(shi)用幹(gan)凈(jing)的(de)塑(su)料(liao)容器(qi)配置(zhi)洗(xi)滌(di)液(ye)。使(shi)用前(qian)充(chong)分混勻(yun)試劑盒裏的(de)各(ge)種成份及樣品。

6． 洗(xi)滌(di)酶(mei)標板時(shi)應充分拍(pai)幹(gan)，不要(yao)將(jiang)吸(xi)水(shui)紙直(zhi)接放入酶(mei)標反應孔中(zhong)吸(xi)水(shui)。

7． 底物A應揮(hui)發(fa)，避(bi)免(mian)長時(shi)間打(da)開蓋子(zi)。底(di)物B對(dui)光敏(min)感，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴(bao)露(lu)於光下。避(bi)免(mian)用手接(jie)觸，有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後(hou)應立即(ji)讀(du)取OD值。

8． 加(jia)入試劑的順序(xu)應壹致(zhi)，以保(bao)證所(suo)有(you)反應板孔溫(wen)育(yu)的(de)時(shi)間壹(yi)樣。

9． 按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)中標明(ming)的時(shi)間、加(jia)液(ye)的(de)量及順序(xu)進行溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)。

ELISA試劑盒樣品收集(ji)、處(chu)理(li)及保(bao)存(cun)方(fang)法

、 血(xue)清(qing)-----操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何細(xi)胞刺激(ji)。使(shi)用不(bu)含熱原(yuan)和內(nei)毒(du)素(su)的試管。收集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，000×g離心(xin)0分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞迅速(su)小心(xin)地(di)分離。

2、 血(xue)漿-----EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)、肝素血(xue)漿可(ke)用於檢測。000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒。

3、 細胞上清(qing)液(ye)---000×g離心(xin)0分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。

4、 組織(zhi)勻(yun)漿-----將(jiang)組(zu)織(zhi)加入適量生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。000×g離心(xin)0分鐘(zhong)，取上清(qing)液(ye)

5、 保(bao)存(cun)------如果(guo)樣品不立(li)即使(shi)用，應將(jiang)其(qi)分成(cheng)小部分-70 ℃保(bao)存(cun)，避(bi)免(mian)反復冷凍。盡可(ke)能的不要(yao)使(shi)用溶(rong)血(xue)或(huo)高(gao)血(xue)脂血(xue)。如果(guo)血(xue)清(qing)中大(da)量顆(ke)粒，檢測前(qian)先(xian)離心(xin)或(huo)過濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的(de)溫(wen)度(du)加(jia)熱解凍。應在(zai)室溫(wen)下(xia)解凍並確(que)保(bao)樣品均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分解凍。

試劑的準備(bei)

． 標準品：標準品的系(xi)列稀釋(shi)應在(zai)實(shi)驗(yan)時(shi)準備(bei)，不能(neng)儲存(cun)。稀釋(shi)前(qian)將(jiang)標準品振(zhen)蕩混勻(yun)。稀(xi)釋(shi)比(bi)例(li)按(an)下表中進行：

800 umol/L （6號標準品） 原(yuan)倍濃度(du)不(bu)用(yong)稀釋直(zhi)接加入50ul。
400 umol/L （5號標準品） 00ul的原(yuan)倍標準品加入00ul的標準品稀釋(shi)液(ye)
200 umol/L （4號(hao)標準品） 00ul的5號(hao)標準品加入00ul的標準品稀釋(shi)液(ye)
00 umol/L （3號(hao)標準品） 00ul的4號(hao)標準品加入00ul的標準品稀釋(shi)液(ye)
50 umol/L （2號(hao)標準品） 00ul的3號(hao)標準品加入00ul的標準品稀釋(shi)液(ye)
25 umol/L （號(hao)標準品） 00ul的2號(hao)標準品加入00ul的標準品稀釋(shi)液(ye)
0 umol/L （空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)） 原(yuan)始濃度(du)不(bu)用(yong)稀釋直(zhi)接加入50ul。

2． 洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye)（50×）的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸餾(liu)水(shui)50倍稀(xi)釋。

ELISA試劑盒操作(zuo)步驟

． 使(shi)用前(qian)，將(jiang)所(suo)有(you)試劑充分混勻(yun)。不(bu)要(yao)使(shi)液(ye)體(ti)產(chan)生(sheng)大量的泡(pao)沫(mo)，以免加(jia)樣時(shi)加入大量的氣(qi)泡，產(chan)生加(jia)樣上的(de)誤(wu)差(cha)。

2． 根據(ju)待(dai)測樣品數量加上(shang)標準品的數(shu)量決定所(suo)需(xu)的板條數(shu)。每(mei)個(ge)標準品和空(kong)白(bai)孔建議做(zuo)復孔。每(mei)個(ge)樣品根據(ju)自己(ji)的數量來定，能(neng)使(shi)用復孔的(de)盡量做(zuo)復孔。標本(ben)用標本(ben)稀釋(shi)液(ye)：稀(xi)釋(shi)後(hou)加入50ul於反應孔內(nei)。

3． 加(jia)入稀釋好後(hou)的(de)標準品50ul於反(fan)應孔、加(jia)入待(dai)測樣品50ul於反(fan)應孔內(nei)。立(li)即加(jia)入50ul的標記的抗體(ti)。蓋上(shang)膜(mo)板，輕輕振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)小時(shi)。

4． 甩去孔內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩去洗(xi)滌(di)液(ye)，用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹(gan)。重復此操作(zuo)3次。如果(guo)用洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數增加(jia)壹(yi)次。

5． 每(mei)孔加(jia)入60ul的親和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP，輕輕振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。

6． 甩去孔內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩去洗(xi)滌(di)液(ye)，用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹(gan)。重復此操作(zuo)3次。如果(guo)用洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數增加(jia)壹(yi)次。

7． 每(mei)孔加(jia)入底物A、B各50ul，輕輕振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)0分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。

8． 取出酶(mei)標板，迅速(su)加(jia)入50ul終止液(ye)，加(jia)入終止液(ye)後(hou)應立即(ji)測定結(jie)果(guo)。

9． 在(zai)450nm波長處測定各(ge)孔的(de)OD值(zhi)。

建議使(shi)用的(de)實(shi)驗(yan)方(fang)案

  標準品濃度(du)（umol/L）  
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 00 00 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限

6號標準品以上的(de)結(jie)果(guo)為非(fei)線性(xing)的，根(gen)據(ju)此(ci)標準曲線(xian)無(wu)法(fa)得(de)到(dao)的結(jie)果(guo)。

試劑盒性能(neng)

. 靈敏(min)度(du)：zui小的(de)檢測濃度(du)小於(yu)號(hao)標準品。稀釋(shi)度的(de)線(xian)性(xing)。樣品線性(xing)回歸(gui)與(yu)預(yu)期濃度(du)相(xiang)關系(xi)數(shu)R值為0.990。

2. 特異性：不(bu)與其(qi)它細(xi)胞因子(zi)反(fan)應。

3. 重復性：板內(nei)、板間變異系(xi)數(shu)均(jun)小於(yu)0%。