豬白細胞介(jie)素（IL-）ELISA試(shi)劑(ji)盒技術分析

豬白細胞介(jie)素（IL-）ELISA試(shi)劑(ji)盒技術分析

ELISA試劑(ji)盒實驗(yan)原(yuan)理
本(ben)試(shi)劑(ji)盒應(ying)用雙抗體夾心(xin)法(fa)測定標(biao)本(ben)中豬(zhu)白細胞介(jie)素 (IL-)水(shui)平(ping)。用純化的(de)豬白細胞
介(jie)素 (IL-)抗(kang)體包(bao)被微(wei)孔(kong)板(ban)，制(zhi)成固(gu)相抗體，往包(bao)被單抗的(de)微(wei)孔(kong)中依次(ci)加入(ru)白細胞介(jie)素
(IL-)，再(zai)與 HRP 標(biao)記(ji)的(de)白細胞介(jie)素 (IL-)抗(kang)體結合，形(xing)成抗(kang)體-抗原(yuan)-酶(mei)標(biao)抗(kang)體復(fu)合物(wu)，
經(jing)過*洗滌後加底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在 HRP 酶(mei)的(de)催化下轉化(hua)成藍(lan)色(se)，並在酸的(de)作用下
轉化成zui終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和樣品(pin)中的(de)白細胞介(jie)素 (IL-)呈(cheng)正(zheng)相關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在 450nm
波長下(xia)測定吸光度（OD 值），通(tong)過標(biao)準(zhun)曲線(xian)計(ji)算(suan)樣品(pin)中豬(zhu)白細胞介(jie)素 (IL-)濃度。
標(biao)本(ben)要(yao)求(qiu)
．標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後盡(jin)早進行提取(qu)，提取(qu)按(an)相關(guan)文(wen)獻(xian)進行，提取(qu)後應(ying)盡快(kuai)進行實驗(yan)。若不(bu)能
馬(ma)上進行試驗(yan)，可將標(biao)本(ben)放於-20℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融
2．不(bu)能檢(jian)測含 NaN3 的(de)樣品，因 NaN3 抑(yi)制(zhi)辣(la)根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活性(xing)。
ELISA試(shi)劑(ji)盒操(cao)作步驟(zhou)
.標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)：本(ben)試劑(ji)盒提供原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品(pin)壹支(zhi)，用戶可按照(zhao)下(xia)列(lie)圖(tu)表(biao)在小試管(guan)中進行稀(xi)
釋(shi)。
20 ng/L
5 號標(biao)準(zhun)品(pin)
50µl 的(de)原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品(pin)加入(ru) 50µl 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
60 ng/L
4 號標(biao)準(zhun)品(pin)
50µl 的(de) 5 號標(biao)準(zhun)品(pin)加入(ru) 50µl 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
30 ng/L
3 號標(biao)準(zhun)品(pin)
50µl 的(de) 4 號標(biao)準(zhun)品(pin)加入(ru) 50µl 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
5 ng/L
2 號標(biao)準(zhun)品(pin)
50µl 的(de) 3 號標(biao)準(zhun)品(pin)加入(ru) 50µl 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
7.5 ng/L
號標(biao)準(zhun)品(pin)
50µl 的(de) 2 號標(biao)準(zhun)品(pin)加入(ru) 50µl 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
2.加樣(yang)：分別設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣(yang)品(pin)及酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)，其余各步(bu)操(cao)作相同）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、
待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包(bao)被板上標(biao)準(zhun)品(pin)準確加樣(yang) 50µl，待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中先加樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye) 40µl，
然(ran)後再(zai)加待(dai)測樣品(pin) 0µl（樣(yang)品zui終稀(xi)釋(shi)度為 5 倍）。加樣(yang)將(jiang)樣品(pin)加於酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡
量(liang)不(bu)觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。
3.溫(wen)育：用封板膜封(feng)板後置(zhi) 37℃溫(wen)育 30 分鐘(zhong)。
4.配(pei)液(ye)：將(jiang) 30 倍濃縮(suo)洗滌液(ye)用蒸(zheng)餾水(shui) 30 倍稀(xi)釋(shi)後備(bei)用
5.洗滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜置(zhi) 30 秒(miao)後棄去(qu)，如此(ci)
重(zhong)復(fu) 5 次(ci)，拍(pai)幹(gan)。
6.加酶(mei)：每孔(kong)加入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji) 50µl，空白孔(kong)除(chu)外(wai)。
7.溫育：操(cao)作同 3。
8.洗滌：操(cao)作同 5。
9.顯色(se)：每孔(kong)先加入(ru)顯色(se)劑(ji) A50µl，再加入(ru)顯色(se)劑(ji) B50µl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避光顯色(se)
0 分鐘(zhong).
0. 終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液(ye) 50µl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此(ci)時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。
. 測定：以(yi)空(kong)白空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm 波長(chang)依序(xu)測量各孔(kong)的(de)吸光度（OD 值）。 測定應(ying)在加終(zhong)止(zhi)
液(ye)後 5 分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行。
操(cao)作程(cheng)序總(zong)結(jie)：
ELISA試劑(ji)盒計(ji)算(suan)
以(yi)標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃度為橫(heng)坐標(biao)，OD 值為縱(zong)坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪(hui)出標(biao)準(zhun)曲線(xian)，根(gen)據樣(yang)品(pin)的(de)
OD 值由標(biao)準(zhun)曲線(xian)查出相應(ying)的(de)濃度；再乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數；或用標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃度與 OD 值計(ji)算(suan)出標(biao)
準(zhun)曲線(xian)的(de)直線(xian)回歸方(fang)程(cheng)式，將(jiang)樣(yang)品的(de) OD 值代入(ru)方(fang)程(cheng)式，計(ji)算(suan)出樣品濃度，再乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，
即為(wei)樣(yang)品的(de)實際(ji)濃度。
註意(yi)事(shi)項(xiang)
．試劑(ji)盒從冷(leng)藏環(huan)境(jing)中取(qu)出應(ying)在室溫平(ping)衡(heng) 5-30 分鐘(zhong)後方(fang)可使用，酶(mei)標(biao)包(bao)被板開(kai)封後如未(wei)
用完，板(ban)條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入(ru)密(mi)封袋(dai)中保(bao)存(cun)。
2．濃洗滌液(ye)可能會有結(jie)晶(jing)析出，稀(xi)釋(shi)時可在水浴中加溫(wen)助溶(rong)，洗滌時不(bu)影(ying)響(xiang)結果(guo)。
3．各步(bu)加樣(yang)均(jun)應(ying)使用加樣(yang)器(qi)，並經(jing)常(chang)校對(dui)其準確性(xing)，以(yi)避免試(shi)驗誤(wu)差。壹次(ci)加樣(yang)時間(jian)
控制(zhi)在 5 分鐘(zhong)內(nei)，如標(biao)本(ben)數(shu)量多，使用排槍加樣(yang)。
4．請(qing)每次(ci)測定的(de)同時做標(biao)準(zhun)曲線(xian)，做復(fu)孔(kong)。如標(biao)本(ben)中待(dai)測物(wu)質(zhi)含量(liang)過高（樣(yang)本(ben) OD 值
大於標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)*孔(kong)的(de) OD 值），請(qing)先用樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍數（n 倍）後再(zai)測定，計(ji)
算(suan)時請(qing)zui後乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數（×n×5）。
5．封板膜只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使用，以(yi)避免交(jiao)叉汙染。
6．底(di)物(wu)請(qing)避光保(bao)存(cun)。
7．嚴格按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)操(cao)作進行，試驗(yan)結(jie)果(guo)判(pan)定必須以(yi)酶(mei)標(biao)儀(yi)讀(du)數為(wei)準.
8．所有樣(yang)品(pin)，洗滌液(ye)和(he)各種(zhong)廢棄物(wu)都(dou)應(ying)按傳(chuan)染物(wu)處(chu)理(li)。
9．本試(shi)劑(ji)不(bu)同批號組(zu)分不(bu)得混(hun)用。
保存條件(jian)及(ji)有效期(qi)
．試(shi)劑(ji)盒保存：；2-8℃。