小鼠Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）ELISA試劑盒(he)使用說(shuo)明書(shu)

小鼠Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）ELISA試劑盒(he)使用說(shuo)明書(shu)

本試劑盒(he)僅供(gong)研究(jiu)使用。

ELISA試劑(ji)盒(he)檢(jian)測範圍：96T

0.7 nmol/L -28 nmol/L

使用目的(de)：

本試劑盒(he)用於(yu)測定小鼠血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)及相(xiang)關液(ye)體(ti)樣(yang)本中(zhong)Ⅰ型(xing)膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）含(han)量(liang)。

實(shi)驗原理

本試劑盒(he)應(ying)用(yong)雙抗(kang)體夾(jia)心(xin)法(fa)測定標(biao)本中(zhong)小鼠Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）水(shui)平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的小鼠Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）抗(kang)體包被微(wei)孔板(ban)，制成固相(xiang)抗(kang)體，往(wang)包被單抗(kang)的微(wei)孔中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ），再(zai)與HRP標記(ji)的(de)Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）抗(kang)體結(jie)合，形成抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標抗(kang)體復合物，經過(guo)*洗(xi)滌後加(jia)底(di)物(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍(lan)色，並在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉化(hua)成zui終的(de)黃(huang)色。顏色的深(shen)淺和(he)樣(yang)品中(zhong)的(de)Ⅰ型(xing)膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關。用酶(mei)標儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD值），通(tong)過(guo)標準曲線計算(suan)樣(yang)品中(zhong)小鼠Ⅰ型膠(jiao)原C端(duan)肽（CTX-Ⅰ）濃度(du)。

ELISA試劑(ji)盒(he)組成

標本要求

．標本采集後盡(jin)早進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相(xiang)關文獻進行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡(jin)快進行(xing)實(shi)驗。若(ruo)不(bu)能(neng)馬(ma)上(shang)進行(xing)試驗，可(ke)將標本放於(yu)-20℃保(bao)存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復凍融

2．不(bu)能(neng)檢(jian)測含(han)NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制辣(la)根過(guo)氧化物酶(mei)的（HRP）活性(xing)。

ELISA試(shi)劑盒(he)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

.         標準品(pin)的(de)稀釋(shi)：本試劑盒(he)提(ti)供(gong)原倍(bei)標(biao)準品(pin)壹(yi)支，用戶(hu)可(ke)按(an)照下(xia)列(lie)圖(tu)表(biao)在(zai)小試管中(zhong)進行(xing)稀釋(shi)。

2.         加(jia)樣(yang)：分別設空白孔（空白對照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品及(ji)酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步(bu)操(cao)作(zuo)相(xiang)同(tong)）、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)。在(zai)酶(mei)標包被板(ban)上(shang)標(biao)準品(pin)準確加(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測樣(yang)品孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然後再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品0μl（樣(yang)品zui終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)於(yu)酶(mei)標板(ban)孔底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動混勻(yun)。

3.         溫育：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置(zhi)37℃溫育30分鐘。  

4.         配液(ye)：將30倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)30倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)

5.         洗(xi)滌：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去液(ye)體(ti)，甩幹，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後棄去，如此(ci)重(zhong)復5次(ci)，拍幹。

6.         加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白孔除(chu)外(wai)。

7.         溫育：操(cao)作(zuo)同(tong)3。

8.         洗(xi)滌：操作(zuo)同(tong)5。

9.         顯色(se)：每孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻(yun)，37℃避光(guang)顯色(se)5分鐘.

0.     終止：每孔(kong)加(jia)終止液(ye)50μl，終止反(fan)應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色(se)）。

.     測定：以空白空調(tiao)零，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）。 測定應(ying)在(zai)加(jia)終止液(ye)後(hou)5分鐘以內進行(xing)。

操作(zuo)程序(xu)總(zong)結(jie)：

計算(suan)

  以標準物(wu)的(de)濃度(du)為(wei)橫坐標，OD值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪(hui)出(chu)標準曲線，根據樣(yang)品的(de)OD值(zhi)由(you)標準曲線查出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃度(du)；再(zai)乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)；或(huo)用(yong)標(biao)準物(wu)的(de)濃度(du)與OD值計(ji)算(suan)出(chu)標準曲線的直(zhi)線回(hui)歸(gui)方程式(shi)，將樣(yang)品的(de)OD值(zhi)代(dai)入(ru)方(fang)程式(shi)，計(ji)算(suan)出(chu)樣(yang)品濃度(du)，再(zai)乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，即(ji)為(wei)樣(yang)品的(de)實(shi)際(ji)濃度(du)。

ELISA試劑(ji)盒(he)註意(yi)事(shi)項

．試劑(ji)盒(he)從(cong)冷(leng)藏(zang)環(huan)境中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室溫平(ping)衡(heng)5-30分鐘後方可(ke)使用，酶(mei)標包被板(ban)開(kai)封(feng)後如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，板(ban)條應(ying)裝(zhuang)入密封(feng)袋中(zhong)保(bao)存。

2．濃洗(xi)滌液(ye)可(ke)能(neng)會(hui)有結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀釋(shi)時可在(zai)水(shui)浴(yu)中(zhong)加(jia)溫助(zhu)溶，洗(xi)滌時不影響(xiang)結(jie)果。

3．各步(bu)加(jia)樣(yang)均應(ying)使用加(jia)樣(yang)器(qi)，並經(jing)常校(xiao)對其準確性(xing)，以避免試驗誤差。壹(yi)次(ci)加(jia)樣(yang)時間控(kong)制在(zai)5分鐘內，如標(biao)本數量(liang)多(duo)，使用排槍加(jia)樣(yang)。

4． 請(qing)每次(ci)測定的(de)同(tong)時(shi)做(zuo)標(biao)準曲線，做復孔。如標本中(zhong)待(dai)測物質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高（樣(yang)本OD值大(da)於(yu)標(biao)準品(pin)孔(kong)*孔的OD值），請(qing)先(xian)用樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後(hou)再(zai)測定，計(ji)算(suan)時(shi)請(qing)zui後(hou)乘以總稀釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。

5． 封(feng)板(ban)膜(mo)只限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使用，以避免交(jiao)叉汙染(ran)。

6．底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保存。

7．嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明書(shu)的操(cao)作(zuo)進行(xing)，試驗結(jie)果判定必須以酶(mei)標儀(yi)讀(du)數為(wei)準.

8．所有樣(yang)品，洗(xi)滌液(ye)和(he)各種(zhong)廢棄(qi)物都應(ying)按(an)傳染(ran)物(wu)處理(li)。

9．本試劑不同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分不得(de)混用。

0. 如(ru)與英文(wen)說(shuo)明書(shu)有異(yi)，以英文說(shuo)明書(shu)為(wei)準。

保(bao)存條件(jian)及(ji)有(you)效(xiao)期

．試劑盒(he)保存：；2-8℃。

2．有效(xiao)期：6個月