大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）ELISA試(shi)劑(ji)盒使用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)

大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）ELISA試(shi)劑(ji)盒使用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)

本(ben)試(shi)劑(ji)盒僅供(gong)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)。
大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）檢(jian)測範(fan)圍(wei)： 96T
2.5 U/mL - 80 U/mL
使用(yong)目(mu)的：
本(ben)試(shi)劑(ji)盒用於測定(ding)大鼠血(xue)清、血(xue)漿(jiang)及(ji)相(xiang)關(guan)液(ye)體樣本(ben)中超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）含(han)量。
實驗原理
本(ben)試(shi)劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心法測定(ding)標(biao)本(ben)中大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）水平(ping)。用純(chun)化(hua)的大
鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）抗(kang)體(ti)包被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)，制成(cheng)固相(xiang)抗(kang)體(ti)，往包被(bei)單抗(kang)的微(wei)孔(kong)中依(yi)次(ci)加入
超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD），再(zai)與(yu)HRP 標記(ji)的超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）抗(kang)體(ti)結合(he)，形成(cheng)抗(kang)體(ti)-
抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)復合(he)物，經(jing)過(guo)*洗(xi)滌(di)後(hou)加底物TMB 顯(xian)色。TMB 在(zai)HRP 酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)
藍色(se)，並在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下轉化(hua)成(cheng)zui終的黃色。顏色(se)的深(shen)淺和(he)樣品中的超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）
呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波(bo)長下(xia)測定(ding)吸(xi)光度（OD 值(zhi)），通過(guo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)計算樣品中大鼠
超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）濃(nong)度。
大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）試(shi)劑(ji)盒組成(cheng)
30 倍濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye) 20ml× 瓶(ping) 7 終(zhong)止(zhi)液(ye) 6ml× 瓶(ping)
2 酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji) 6ml× 瓶(ping) 8 標(biao)準(zhun)品(pin)（60 U/mL） 0.5ml× 瓶(ping)
3 酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban) 2 孔(kong)×8 條(tiao) 9 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye) .5ml× 瓶(ping)
4 樣品稀(xi)釋(shi)液(ye) 6ml× 瓶(ping) 0 說(shuo)明(ming)書(shu) 份(fen)
5 顯(xian)色劑(ji)A 液(ye) 6ml× 瓶(ping) 封(feng)板(ban)膜(mo) 2 張
6 顯(xian)色劑(ji)B 液(ye) 6ml×/瓶(ping) 2 密(mi)封(feng)袋(dai) 個(ge)
大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）標(biao)本(ben)要(yao)求(qiu)
．標(biao)本(ben)采集(ji)後(hou)盡早進(jin)行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關(guan)文(wen)獻進(jin)行，提(ti)取(qu)後(hou)應盡快進(jin)行實驗。若不(bu)能(neng)
馬上進(jin)行試(shi)驗(yan)，可(ke)將標本(ben)放(fang)於-20℃保(bao)存，但應(ying)避(bi)免(mian)反復凍融(rong)
2．不(bu)能檢(jian)測含(han)NaN3 的樣品，因NaN3 抑(yi)制辣(la)根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的（HRP）活(huo)性(xing)。
操(cao)作(zuo)步驟(zhou)
. 標準(zhun)品(pin)的稀(xi)釋(shi)：本(ben)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供原倍標準(zhun)品(pin)壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶可(ke)按照下(xia)列圖表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管(guan)中進(jin)行稀(xi)
釋(shi)。
80U/mL 5 號標準(zhun)品(pin) 50μl 的原倍標準(zhun)品(pin)加入50μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
40U/mL 4 號標(biao)準(zhun)品(pin) 50μl 的5 號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入50μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
20 U/mL 3 號標(biao)準(zhun)品(pin) 50μl 的4 號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入50μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 U/mL 2 號標(biao)準(zhun)品(pin) 50μl 的3 號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入50μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
5 U/mL 號標(biao)準(zhun)品(pin) 50μl 的2 號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入50μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
2. 加樣：分別(bie)設(she)空(kong)白孔(kong)（空白對照(zhao)孔(kong)不加樣品及(ji)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)，其(qi)余(yu)各步操(cao)作(zuo)相(xiang)同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、
待測樣品孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)上標準(zhun)品(pin)準(zhun)確(que)加樣50μl，待測樣品孔(kong)中先(xian)加樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，
然後(hou)再加待測樣品0μl（樣品zui終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為5 倍）。加樣將樣品加於酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡
量不觸及(ji)孔(kong)壁，輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混勻。
3. 溫(wen)育(yu)：用封板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置37℃溫(wen)育30 分鐘(zhong)。
4. 配液(ye)：將30 倍濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾(liu)水30 倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備用
5. 洗(xi)滌(di)：小心揭掉封板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)30 秒後(hou)棄去(qu)，如(ru)此(ci)
重復5 次(ci)，拍幹。
6. 加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加入酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外(wai)。
7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同(tong)3。
8. 洗(xi)滌(di)：操(cao)作(zuo)同(tong)5。
9. 顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先(xian)加入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避(bi)光顯(xian)色
5 分鐘(zhong).
0. 終止：每(mei)孔(kong)加終止液(ye)50μl，終止(zhi)反應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立(li)轉黃色）。
. 測定(ding)：以(yi)空(kong)白空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm 波(bo)長依(yi)序測量(liang)各孔(kong)的吸(xi)光度（OD 值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加終止
液(ye)後(hou)5 分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行。
操(cao)作(zuo)程序總結：
計算
以(yi)標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度為橫坐(zuo)標，OD 值(zhi)為縱坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上繪出標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，根(gen)據樣品的
OD 值(zhi)由標準(zhun)曲(qu)線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應的濃(nong)度；再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)；或(huo)用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度與(yu)OD 值計算出(chu)標
準(zhun)曲(qu)線(xian)的直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方程式(shi)，將樣品的OD 值(zhi)代(dai)入(ru)方程式(shi)，計算出(chu)樣品濃(nong)度，再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)，
即(ji)為樣品的實際(ji)濃度。

大鼠超氧化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）註(zhu)意事(shi)項
．試(shi)劑(ji)盒從冷藏(zang)環境(jing)中取(qu)出應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平(ping)衡5-30 分鐘(zhong)後(hou)方可(ke)使用，酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)開封(feng)後(hou)如(ru)未
用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應(ying)裝入密封袋(dai)中保(bao)存。
2．濃洗(xi)滌(di)液(ye)可(ke)能會有(you)結晶析(xi)出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在(zai)水浴中加溫助(zhu)溶(rong)，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)影(ying)響(xiang)結果(guo)。
3．各步加樣均應(ying)使(shi)用加樣器(qi)，並經(jing)常(chang)校對其(qi)準(zhun)確(que)性，以(yi)避(bi)免(mian)試(shi)驗(yan)誤(wu)差。壹次(ci)加樣時(shi)間(jian)
控制在(zai)5 分鐘(zhong)內，如(ru)標(biao)本(ben)數(shu)量(liang)多，使用排槍(qiang)加樣。
4． 請每(mei)次(ci)測定(ding)的同(tong)時(shi)做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)，做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標(biao)本(ben)中待測物(wu)質(zhi)含量(liang)過(guo)高（樣本(ben)OD 值(zhi)
大於標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)*孔(kong)的OD 值(zhi)），請先(xian)用(yong)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹定(ding)倍(bei)數(shu)（n 倍(bei)）後(hou)再測定(ding)，計
算時(shi)請zui後(hou)乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)（×n×5）。
5． 封(feng)板(ban)膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。
6．底(di)物(wu)請避(bi)光保(bao)存。
7．嚴(yan)格按照說(shuo)明(ming)書(shu)的操(cao)作(zuo)進(jin)行，試(shi)驗(yan)結果(guo)判(pan)定(ding)必須以(yi)酶(mei)標(biao)儀(yi)讀(du)數(shu)為準(zhun).
8．所(suo)有(you)樣品，洗(xi)滌(di)液(ye)和(he)各種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都(dou)應按傳(chuan)染物(wu)處(chu)理(li)。
9．本(ben)試(shi)劑(ji)不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分不(bu)得(de)混用。
保(bao)存條(tiao)件及(ji)有(you)效期(qi)
．試(shi)劑(ji)盒保(bao)存：；2-8℃。
2．有(you)效期(qi)：6 個月