大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）elisa試劑盒銷售說(shuo)明(ming)書(shu)

大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）elisa試劑盒銷售說(shuo)明(ming)書(shu)

使(shi)用(yong)目(mu)的：
本(ben)大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白試劑盒用(yong)於(yu)測定大(da)鼠(shu)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)及(ji)相(xiang)關(guan)液(ye)體樣本(ben)中極低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）含量。
實驗(yan)原理(li)
本(ben)大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白試劑盒應用(yong)雙(shuang)抗(kang)體夾心法測定標(biao)本(ben)中大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）水平(ping)。用(yong)純化的(de)大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）抗(kang)體包(bao)被微孔(kong)板，制成(cheng)固(gu)相抗(kang)體，往包(bao)被單(dan)抗(kang)的微孔(kong)中依次加(jia)入(ru)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL），再(zai)與HRP標(biao)記(ji)的(de)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）抗(kang)體結合，形成(cheng)抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗(kang)體復合物，經(jing)過(guo)*洗滌後(hou)加(jia)底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶的催化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色(se)，並(bing)在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉化成zui終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品中的極低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）呈(cheng)正(zheng)相關(guan)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm波長下測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)），通(tong)過標(biao)準曲(qu)線(xian)計算(suan)樣(yang)品中大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白（VLDL）濃(nong)度。 
試劑盒組(zu)成 
30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液 20ml×瓶(ping) 7 終止(zhi)液(ye) 6ml×瓶(ping)
2 酶標(biao)試劑 6ml×瓶(ping) 8 標(biao)準品（240μg/ml） 0.5ml×瓶(ping)
3 酶標(biao)包(bao)被板 2孔×8條 9 標(biao)準品稀釋液 .5ml×瓶(ping)
4 樣品稀釋液 6ml×瓶(ping) 0 說明(ming)書(shu) 份
5 顯色(se)劑(ji)A液(ye) 6ml×瓶(ping) 封板膜(mo) 2張 
6 顯色(se)劑(ji)B液(ye) 6ml×/瓶(ping) 2 密封袋 個
標(biao)本(ben)要求(qiu) 
．大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡早(zao)進行(xing)提(ti)取，提(ti)取按相(xiang)關(guan)文(wen)獻進行(xing)，提(ti)取後(hou)應盡快進行(xing)實驗(yan)。若(ruo)不(bu)能馬(ma)上(shang)進行(xing)試驗，可將(jiang)標(biao)本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但應避免(mian)反(fan)復凍融
2．不能檢(jian)測(ce)含NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制辣根過(guo)氧化物酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性。
操作步(bu)驟
. 標(biao)準品的稀(xi)釋：本(ben)試劑盒提(ti)供(gong)原倍(bei)標(biao)準品壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶(hu)可按照(zhao)下(xia)列圖表在(zai)小試管中進行(xing)稀(xi)釋。
20μg/ml 5號(hao)標(biao)準品 50μl的原(yuan)倍(bei)標(biao)準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀釋液
60μg/ml 4號(hao)標(biao)準品 50μl的5號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀釋液
30μg/ml 3號(hao)標(biao)準品 50μl的4號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀釋液
5μg/ml 2號(hao)標(biao)準品 50μl的3號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀釋液
7.5μg/ml 號(hao)標(biao)準品 50μl的2號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀釋液
2. 加(jia)樣：分(fen)別設(she)空(kong)白孔(kong)（空白對照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣品及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其(qi)余各(ge)步(bu)操作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測樣品孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被板上(shang)標(biao)準品準確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測樣品孔中先加(jia)樣品稀釋液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣品0μl（樣品zui終稀(xi)釋度為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣(yang)品加(jia)於酶(mei)標(biao)板孔底部(bu)，盡量不觸(chu)及(ji)孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動混勻。
3. 溫(wen)育：用(yong)封板膜(mo)封板後(hou)置37℃溫(wen)育30分鐘。 
4. 配(pei)液(ye)：將(jiang)30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液用(yong)蒸餾水30倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備(bei)用(yong)
5. 洗(xi)滌：大(da)鼠(shu)極(ji)低(di)密度(du)脂蛋(dan)白小(xiao)心揭(jie)掉(diao)封板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體，甩幹(gan)，每孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如(ru)此(ci)重復(fu)5次，拍(pai)幹(gan)。
6. 加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試劑50μl，空白孔(kong)除外(wai)。 
7. 溫(wen)育：操作同(tong)3。
8. 洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同(tong)5。
9. 顯色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混(hun)勻，37℃避光(guang)顯色(se)5分(fen)鐘.
0. 終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反(fan)應（此(ci)時藍(lan)色(se)立轉黃色(se)）。
. 測(ce)定(ding)：以空白空(kong)調(tiao)零，450nm波長(chang)依序測(ce)量各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測(ce)定應在(zai)加(jia)終止(zhi)液(ye)後(hou)5分(fen)鐘以內進行(xing)。