大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)試劑(ji)盒使用說(shuo)明書

大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)試劑(ji)盒使用說(shuo)明書

使用目的(de)：
本大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)試劑(ji)盒用於測定(ding)大鼠血清、血漿(jiang)及(ji)相關液(ye)體(ti)樣本中誘(you)導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS）含量。

實驗(yan)原(yuan)理(li)
本大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)試劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗體(ti)夾(jia)心(xin)法測(ce)定(ding)標本中大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS）水平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS）抗體(ti)包被(bei)微孔板(ban)，制成固(gu)相抗體，往(wang)包被(bei)單抗的(de)微(wei)孔中依次加入誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS），再與(yu)HRP標記(ji)的(de)誘(you)導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS）抗體(ti)結合(he)，形(xing)成抗(kang)體-抗原(yuan)-酶(mei)標抗(kang)體(ti)復(fu)合(he)物(wu)，經過(guo)*洗(xi)滌後加(jia)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在(zai)HRP酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍(lan)色(se)，並(bing)在(zai)酸的(de)作(zuo)用下(xia)轉化(hua)成zui終(zhong)的(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺和(he)樣品(pin)中的(de)誘(you)導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS）呈正相關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在(zai)450nm波長下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)），通過(guo)標準(zhun)曲(qu)線計算(suan)樣(yang)品中大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)（iNOS）濃(nong)度(du)。 

試劑(ji)盒組(zu)成 
30倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌液 20ml×瓶 7 終(zhong)止(zhi)液(ye) 6ml×瓶
2 酶(mei)標試(shi)劑(ji) 6ml×瓶 8 標準(zhun)品(pin)（24 IU/L） 0.5ml×瓶
3 酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban) 2孔×8條(tiao) 9 標準(zhun)品(pin)稀釋液 .5ml×瓶
4 樣品稀釋液 6ml×瓶 0 說(shuo)明書 份(fen)
5 顯(xian)色(se)劑(ji)A液(ye) 6ml×瓶 封板(ban)膜 2張(zhang) 
6 顯(xian)色(se)劑(ji)B液(ye) 6ml×/瓶 2 密封袋 個(ge)

標本要(yao)求 
．大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)標本采集後(hou)盡早(zao)進行提取，提(ti)取(qu)按(an)相關文(wen)獻(xian)進行，提取後(hou)應(ying)盡快(kuai)進行實驗(yan)。若(ruo)不能馬(ma)上進(jin)行試驗(yan)，可(ke)將標本放於-20℃保(bao)存，但應避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)
2．不能檢(jian)測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制(zhi)辣(la)根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活性。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)
標準(zhun)品(pin)的(de)稀釋：本試劑(ji)盒提供原(yuan)倍(bei)標準(zhun)品(pin)壹(yi)支(zhi)，用戶(hu)可(ke)按(an)照(zhao)下(xia)列圖表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管(guan)中進(jin)行稀釋。
2 IU/L 5號標準(zhun)品(pin) 50μl的(de)原(yuan)倍(bei)標準(zhun)品(pin)加(jia)入50μl標準(zhun)品(pin)稀釋液
6 IU/L 4號(hao)標準(zhun)品(pin) 50μl的(de)5號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入50μl標準(zhun)品(pin)稀釋液
3 IU/L 3號(hao)標準(zhun)品(pin) 50μl的(de)4號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入50μl標準(zhun)品(pin)稀釋液
.5 IU/L 2號(hao)標準(zhun)品(pin) 50μl的(de)3號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入50μl標準(zhun)品(pin)稀釋液
0.75 IU/L 號(hao)標準(zhun)品(pin) 50μl的(de)2號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入50μl標準(zhun)品(pin)稀釋液

加(jia)樣(yang)：大鼠誘導型壹(yi)氧化(hua)氮合(he)成酶(mei)分(fen)別設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品及(ji)酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步操(cao)作(zuo)相同）、標準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)上標準(zhun)品(pin)準(zhun)確加樣(yang)50μl，待測(ce)樣品孔中先加(jia)樣品(pin)稀釋液40μl，然後(hou)再加待(dai)測樣品0μl（樣品(pin)zui終(zhong)稀釋度(du)為5倍(bei)）。加樣(yang)將樣(yang)品(pin)加於酶(mei)標板(ban)孔底(di)部(bu)，盡量不觸及(ji)孔壁，輕輕晃動(dong)混(hun)勻(yun)。
溫育(yu)：用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。 
配液：將20倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水20倍(bei)稀釋後備(bei)用
洗(xi)滌：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每孔加滿洗(xi)滌液，靜置(zhi)30秒後棄(qi)去，如此(ci)重復(fu)5次，拍幹(gan)。
加酶(mei)：每孔(kong)加入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外。 
溫育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。
洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同5。
顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)5分(fen)鐘(zhong).
終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應（此(ci)時藍(lan)色(se)立(li)轉黃色(se)）。
測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波長依序測(ce)量各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)5分(fen)鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行。