現(xian)貨(huo)狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）ELISA試(shi)劑盒(he)實(shi)驗(yan)說(shuo)明書(shu)

現(xian)貨(huo)狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）ELISA試(shi)劑盒(he)實(shi)驗(yan)說(shuo)明書(shu)

試(shi)劑盒(he)僅(jin)供研(yan)究(jiu)使(shi)用。

檢(jian)測範圍： 96T
50ng/ml-000ng/ml

使(shi)用目的：
本(ben)狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH試(shi)劑盒(he)用於測定狗(gou)血清、血漿(jiang)及(ji)相關液(ye)體(ti)樣(yang)本(ben)中促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）含(han)量。

實驗(yan)原(yuan)理(li)
狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH試(shi)劑盒(he)應用雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)法測定標本中狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）水(shui)平。用純(chun)化(hua)的狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）抗(kang)體(ti)包被(bei)微(wei)孔(kong)板，制(zhi)成固相(xiang)抗(kang)體(ti)，往包(bao)被(bei)單(dan)抗的微(wei)孔(kong)中依次(ci)加入(ru)促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH），再與(yu)HRP標記的促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）抗(kang)體(ti)結(jie)合，形成抗體(ti)-抗原(yuan)-酶(mei)標抗體(ti)復(fu)合物(wu)，經(jing)過*洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)底(di)物(wu)TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色，並(bing)在酸(suan)的作(zuo)用下(xia)轉(zhuan)化(hua)成zui終的黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的深(shen)淺和樣(yang)品(pin)中的促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）呈正相(xiang)關。用酶(mei)標儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定吸光度(du)（OD值(zhi)），通過標(biao)準曲線計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素（LH）濃(nong)度(du)。 

狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH試(shi)劑盒(he)組(zu)成 
30倍濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液 20ml×瓶(ping) 7 終止(zhi)液 6ml×瓶(ping)
2 酶(mei)標試(shi)劑 6ml×瓶(ping) 8 標(biao)準品（2000ng/ml） 0.5ml×瓶(ping)
3 酶(mei)標包被(bei)板 2孔(kong)×8條(tiao) 9 標準品稀(xi)釋液(ye) .5ml×瓶(ping)
4 樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye) 6ml×瓶(ping) 0 說(shuo)明書(shu) 份
5 顯色劑(ji)A液 6ml×瓶(ping) 封板膜(mo) 2張(zhang) 
6 顯色劑(ji)B液 6ml×/瓶(ping) 2 密(mi)封袋 個

標(biao)本要(yao)求 
．標(biao)本采集後(hou)盡早進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提取(qu)後(hou)應盡快(kuai)進(jin)行(xing)實驗(yan)。若不(bu)能(neng)馬(ma)上進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)，可將標本(ben)放於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)
2．不(bu)能(neng)檢(jian)測含(han)NaN3的樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣(la)根(gen)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的（HRP）活(huo)性。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)
. 標(biao)準品的稀(xi)釋：本(ben)狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH試(shi)劑盒(he)提(ti)供原(yuan)倍(bei)標準品壹(yi)支(zhi)，用戶可按(an)照(zhao)下(xia)列圖(tu)表(biao)在小試(shi)管中進(jin)行(xing)稀(xi)釋。
000ng/ml 5號標準品 50μl的原(yuan)倍(bei)標準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)
500ng/ml 4號標準品 50μl的5號標準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)
250ng/ml 3號標準品 50μl的4號標準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)
25ng/ml 2號標準品 50μl的3號標準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)
62.5ng/ml 號標準品 50μl的2號標準品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品稀(xi)釋液(ye)

2. 加(jia)樣(yang)：分(fen)別設空白孔(kong)（空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標試(shi)劑，其(qi)余各(ge)步(bu)操作(zuo)相(xiang)同）、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標包被(bei)板上標(biao)準品準確加(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待測樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終稀(xi)釋度(du)為5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)於酶(mei)標板孔(kong)底(di)部(bu)，盡量不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混(hun)勻(yun)。
3. 溫(wen)育：用封板膜(mo)封板後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。 
4. 配(pei)液：將30倍濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液用蒸餾(liu)水(shui)30倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備(bei)用
5. 洗滌(di)：小心(xin)揭掉封板膜(mo)，棄去液體(ti)，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如此重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍幹(gan)。
6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試(shi)劑50μl，空白孔(kong)除外(wai)。 
7. 溫(wen)育：操作(zuo)同3。
8. 洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同5。
9. 顯色：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯色劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色5分(fen)鐘.
0. 終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應（此(ci)時藍(lan)色立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。
. 測定：以空白空調零(ling)，450nm波長(chang)依序(xu)測量各孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定應在(zai)加終止(zhi)液後(hou)5分(fen)鐘以(yi)內進(jin)行(xing)。

狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH操作(zuo)程(cheng)序(xu)總結(jie)：
.準備試(shi)劑，樣(yang)品(pin)和標準品
2.加(jia)入(ru)準備好(hao)的樣(yang)品(pin)和標準品，37℃反應30分(fen)鐘 
3.洗(xi)板5次(ci)，加入(ru)酶(mei)標試(shi)劑，37℃反應30分(fen)鐘
4.洗(xi)板5次(ci)，加入(ru)顯色液(ye)A、B，37℃反應0分(fen)鐘
5.加(jia)入(ru)終止(zhi)液
6.5分(fen)鐘之內度(du)OD值(zhi)
7.計(ji)算(suan)

計(ji)算(suan)
以(yi)標(biao)準物(wu)的濃(nong)度(du)為橫坐標(biao)，OD值(zhi)為縱坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙上繪(hui)出(chu)標準曲線，根(gen)據樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)由(you)標準曲線查出(chu)相應的濃(nong)度(du)；再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)；或(huo)用標準物(wu)的濃(nong)度(du)與OD值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標(biao)準曲線的直(zhi)線回歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)代入(ru)方(fang)程(cheng)式(shi)，計(ji)算(suan)出(chu)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)，再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)，即(ji)為樣(yang)品(pin)的實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。 

註意(yi)事項
．狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH試(shi)劑盒(he)從(cong)冷藏環境(jing)中取(qu)出應在(zai)室溫(wen)平衡(heng)5-30分(fen)鐘後(hou)方(fang)可使(shi)用，酶(mei)標包被(bei)板開封後(hou)如未用完，板條應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封袋中保(bao)存(cun)。
2．濃(nong)洗(xi)滌液可能(neng)會有結(jie)晶(jing)析(xi)出(chu)，稀(xi)釋時可在(zai)水(shui)浴中加溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌時不(bu)影(ying)響結(jie)果(guo)。
3．各步(bu)加(jia)樣(yang)均(jun)應使(shi)用加樣(yang)器(qi)，並(bing)經(jing)常(chang)校對(dui)其(qi)準確性，以(yi)避(bi)免試(shi)驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹次(ci)加樣(yang)時間(jian)控制(zhi)在5分(fen)鐘內，如標本(ben)數(shu)量多，使(shi)用排槍加(jia)樣(yang)。
4．請(qing)每(mei)次(ci)測定的同時做(zuo)標(biao)準曲線，做復(fu)孔(kong)。如標本(ben)中待測物(wu)質含(han)量過高(gao)（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大於標準品孔(kong)*孔(kong)的OD值(zhi)），請(qing)先(xian)用樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋壹(yi)定(ding)倍數(shu)（n倍(bei)）後(hou)再測定，計(ji)算(suan)時請(qing)zui後(hou)乘(cheng)以(yi)總稀(xi)釋倍(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封板膜(mo)只(zhi)限壹(yi)次(ci)性使(shi)用，以避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染。
6．底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。
7．嚴格(ge)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)的操作(zuo)進(jin)行(xing)，試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)判定必(bi)須以(yi)酶(mei)標儀讀(du)數(shu)為準.
8．所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌液和各種廢棄物(wu)都(dou)應按(an)傳染(ran)物(wu)處理(li)。
9．本(ben)試(shi)劑不(bu)同批(pi)號組分(fen)不(bu)得(de)混(hun)用。
0.如與英(ying)文(wen)說(shuo)明書(shu)有異，以(yi)英(ying)文(wen)說(shuo)明書(shu)為準。

保(bao)存(cun)條件(jian)及(ji)有效(xiao)期(qi)
．狗(gou)促(cu)黃(huang)體(ti)素LH試(shi)劑盒(he)保(bao)存(cun)：；2-8℃。
2．有效(xiao)期(qi)：6個月