小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）試劑(ji)盒(he)操(cao)作說(shuo)明書(shu)

小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）試劑(ji)盒(he)操(cao)作說(shuo)明書(shu)

本試(shi)劑(ji)盒僅(jin)供(gong)研(yan)究(jiu)使用(yong)。

檢測範圍(wei)：96T

0.3μg/L -9μg/L

使(shi)用(yong)目(mu)的：

本小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白試劑(ji)盒(he)用(yong)於測定小(xiao)鼠(shu)血清、血漿及(ji)相(xiang)關(guan)液體(ti)樣(yang)本中(zhong)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）含量。

實驗原(yuan)理(li)

本試(shi)劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)法測定標(biao)本中(zhong)小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）水平。用(yong)純化(hua)的小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）抗(kang)體(ti)包被微孔板，制成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)體(ti)，往(wang)包被單抗(kang)的微孔中依次(ci)加(jia)入(ru)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX），再(zai)與(yu)HRP標(biao)記的Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）抗(kang)體(ti)結合，形(xing)成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)復合物(wu)，經過(guo)*洗(xi)滌(di)後加(jia)底物(wu)TMB顯色。TMB在HRP酶(mei)的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色，並(bing)在酸(suan)的作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成zui終的黃(huang)色。顏(yan)色的深(shen)淺(qian)和樣(yang)品(pin)中的Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀在450nm波長下(xia)測定吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)），通過(guo)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)計算(suan)樣(yang)品(pin)中小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白（BAX）濃度(du)。

小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白試劑(ji)盒(he)組(zu)成

標(biao)本要求

．標(biao)本采(cai)集(ji)後盡(jin)早(zao)進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關(guan)文獻進行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡(jin)快(kuai)進行(xing)實驗。若(ruo)不(bu)能(neng)馬(ma)上(shang)進行(xing)試(shi)驗，可將(jiang)標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃保存，但(dan)應(ying)避(bi)免反復凍融

2．不(bu)能(neng)檢測含NaN3的樣(yang)品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣(la)根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶的（HRP）活(huo)性(xing)。

操作步驟(zhou)

.標(biao)準(zhun)品(pin)的稀(xi)釋(shi)：本小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白試劑(ji)盒(he)提(ti)供(gong)原(yuan)倍(bei)標(biao)準(zhun)品(pin)壹支(zhi)，用(yong)戶可按照下(xia)列(lie)圖表在小(xiao)試(shi)管(guan)中進行(xing)稀(xi)釋(shi)。

2.加(jia)樣(yang)：分別設(she)空白孔（空白對(dui)照孔不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余(yu)各步(bu)操(cao)作相(xiang)同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔、待測樣(yang)品(pin)孔。在酶(mei)標(biao)包被板上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)準確(que)加(jia)樣(yang)50μl，待測樣(yang)品(pin)孔中先加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液40μl，然後再(zai)加(jia)待測樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終稀釋(shi)度為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標(biao)板孔底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及(ji)孔壁，輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻。

3.溫育(yu)：用(yong)封(feng)板膜(mo)封(feng)板後置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘。  

4.配(pei)液：將30倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液用(yong)蒸餾水30倍(bei)稀釋後備(bei)用(yong)

5.洗(xi)滌(di)：小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白小(xiao)心(xin)揭掉封(feng)板膜(mo)，棄去液體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)30秒(miao)後棄(qi)去，如此重(zhong)復5次(ci)，拍幹。

6.加(jia)酶(mei)：每孔加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空白孔除(chu)外(wai)。

7.溫(wen)育(yu)：操(cao)作同(tong)3。

8.洗(xi)滌(di)：操(cao)作同(tong)5。

9.顯色：每孔先加(jia)入(ru)顯色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光(guang)顯色5分鐘.

0.終止(zhi)：每孔加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)（此時藍(lan)色立(li)轉(zhuan)黃色）。

.測定：以空白空調(tiao)零，450nm波長依序(xu)測量各(ge)孔的吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)）。 測定應(ying)在加(jia)終止(zhi)液後5分鐘以內進行(xing)。

操(cao)作程(cheng)序(xu)總結：

計算(suan)

以標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)為橫坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，根據(ju)樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)由標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)查(zha)出相(xiang)應(ying)的濃(nong)度(du)；再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數；或用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)與(yu)OD值(zhi)計算(suan)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的直線(xian)回(hui)歸方程(cheng)式，將(jiang)樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)代入方程(cheng)式，計算(suan)出樣(yang)品(pin)濃度(du)，再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，即為樣(yang)品(pin)的實際濃度。

註(zhu)意(yi)事項

．小(xiao)鼠(shu)Bcl-2相(xiang)關(guan)X蛋白試劑(ji)盒(he)從(cong)冷藏環(huan)境中(zhong)取出應(ying)在室(shi)溫(wen)平衡(heng)5-30分鐘後方可使(shi)用(yong)，酶標(biao)包被板開(kai)封(feng)後如未(wei)用(yong)完，板條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密封(feng)袋中(zhong)保(bao)存。

2．濃(nong)洗(xi)滌(di)液可能(neng)會(hui)有(you)結晶析出(chu)，稀(xi)釋時可在水(shui)浴(yu)中(zhong)加(jia)溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時不(bu)影(ying)響(xiang)結果。

3．各(ge)步(bu)加(jia)樣(yang)均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並(bing)經(jing)常(chang)校(xiao)對(dui)其準確(que)性(xing)，以避(bi)免試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹(yi)次(ci)加(jia)樣(yang)時間控(kong)制在5分鐘內，如標(biao)本數(shu)量(liang)多，使(shi)用(yong)排槍加(jia)樣(yang)。

4．請(qing)每次(ci)測定的同(tong)時做(zuo)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，做(zuo)復孔。如標(biao)本中(zhong)待測物(wu)質含量過(guo)高(gao)（樣(yang)本OD值(zhi)大(da)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)孔*孔的OD值(zhi)），請(qing)先用(yong)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)壹定(ding)倍(bei)數（n倍(bei)）後再(zai)測定，計算(suan)時請(qing)zui後乘以總稀(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5．封(feng)板膜(mo)只限壹次(ci)性使(shi)用(yong)，以避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

6．底物(wu)請(qing)避光(guang)保存。

7．嚴(yan)格按照說(shuo)明書(shu)的操(cao)作進行(xing)，試(shi)驗結果判定必(bi)須以酶(mei)標(biao)儀讀數(shu)為(wei)準(zhun).

8．所(suo)有樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌(di)液和各(ge)種廢(fei)棄物(wu)都應(ying)按傳染(ran)物(wu)處理(li)。

9．本試(shi)劑(ji)不(bu)同(tong)批(pi)號組(zu)分不(bu)得(de)混(hun)用(yong)。

0. 如與(yu)英文說(shuo)明書(shu)有異(yi)，以英文說(shuo)明書(shu)為準(zhun)。

保存條(tiao)件及(ji)有效期(qi)

．試(shi)劑盒保(bao)存：；2-8℃。

2．有(you)效期(qi)：6個(ge)月