小(xiao)鼠甘(gan)油三酯(zhi)試劑盒實驗步驟(zhou)及事(shi)項說明(ming)

小(xiao)鼠甘(gan)油三酯(zhi)試劑盒實驗步驟(zhou)及事(shi)項說明(ming)

小(xiao)鼠甘(gan)油三酯(zhi)試劑盒實驗操作(zuo)步驟(zhou)：
實驗開始前(qian)，各試劑均應(ying)平衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)（試劑不能直(zhi)接(jie)在(zai)37℃溶解(jie)）；試劑或(huo)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)時(shi)，均需混勻(yun)，混勻(yun)時盡(jin)量避(bi)免起泡(pao)。實驗前應(ying)樣(yang)品含(han)量，如(ru)樣品(pin)濃度過高時，應(ying)對(dui)樣品(pin)進行(xing)稀(xi)釋(shi)，以(yi)使稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)樣(yang)品符(fu)合試劑盒的(de)檢(jian)測(ce)範(fan)圍(wei)，計算(suan)時再乘以相(xiang)應(ying)的(de)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。
. 加樣(yang)：分(fen)別設(she)空(kong)白孔(kong)、標(biao)準孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。空(kong)白孔(kong)加樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液 00μl，余孔(kong)分(fen)別加標(biao)準品或(huo)待測(ce)樣(yang)品(pin)00μl，註意不要有(you)氣泡(pao)，加樣(yang)將樣品(pin)加於(yu)酶(mei)標板孔(kong)底(di)部，盡(jin)量不(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻(yun)，酶標板加上(shang)蓋或(huo)覆(fu)膜，37℃反應(ying)20分(fen)鐘。為(wei)保(bao)證(zheng)實驗結(jie)果(guo)有(you)效性(xing)，每(mei)次實驗請使用新的(de)標(biao)準品溶(rong)液。
2. 棄去(qu)液體(ti)，甩幹(gan)，不(bu)用(yong)洗(xi)滌。每(mei)孔(kong)加 檢(jian)測(ce)溶(rong)液A工作(zuo)液 00μl（在使用(yong)前壹小(xiao)時(shi)內配制(zhi)），酶(mei)標(biao)板加上(shang)覆膜, 37℃反應(ying)60分(fen)鐘。
3. 小(xiao)鼠甘(gan)油三酯(zhi)溫(wen)育60分(fen)鐘後(hou)，棄去(qu)孔(kong)內液體(ti)，甩幹(gan)，洗(xi)板 3次，每(mei)次浸(jin)泡(pao)-2分(fen)鐘，大(da)約400μl/每(mei)孔(kong)，甩幹(gan)（也可輕拍將孔(kong)內液體(ti)拍幹(gan)）。
4. 每(mei)孔(kong)加檢(jian)測(ce)溶(rong)液B工作(zuo)液（同檢(jian)測(ce)A工作(zuo)液） 00μl，酶標板加上(shang)覆膜37℃反應(ying)60分(fen)鐘。
5. 溫(wen)育60分(fen)鐘後(hou)，棄去(qu)孔(kong)內液體(ti)，甩幹(gan)，洗(xi)板5次，每(mei)次浸(jin)泡(pao)-2分(fen)鐘，350μl/每(mei)孔(kong)，甩幹(gan)（也可輕拍將孔(kong)內液體(ti)拍幹(gan)）。
6. 依(yi)序(xu)每(mei)孔(kong)加底(di)物(wu)溶(rong)液90μl，酶標板加上(shang)覆膜37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色（30分(fen)鐘內，此時肉(rou)眼(yan)可見標準品的(de)前(qian)3-4孔(kong)有(you)明(ming)顯(xian)的(de)梯(ti)度蘭(lan)色，後(hou)3-4孔(kong)梯(ti)度不(bu)明(ming)顯(xian)，即(ji)可終止）。
7. 依(yi)序(xu)每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)溶液50μl，終止反應(ying)，此時藍(lan)色立(li)轉黃色。終(zhong)止(zhi)液的(de)加入(ru)順(shun)序應(ying)盡(jin)量與(yu)底(di)物(wu)液的(de)加入(ru)順(shun)序相(xiang)同。為了(le)保(bao)證(zheng)實驗結(jie)果(guo)的(de)準確性(xing)，底(di)物(wu)反應(ying)時(shi)間到(dao)後(hou)應(ying)盡(jin)快(kuai)加入(ru)終(zhong)止液。
8. 用酶聯(lian)儀(yi)在450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量各孔(kong)的(de)光(guang)密度（OD值）。 在(zai)加終(zhong)止(zhi)液後立(li)即進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)。

小(xiao)鼠甘(gan)油三酯(zhi)試劑盒實驗應(ying)註(zhu)意的(de)事(shi)項：
. 試劑準備(bei)：所(suo)有(you)試劑都必須在(zai)使用前(qian)達(da)到(dao)室(shi)溫(wen)，使用(yong)後請立(li)即按(an)照說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)保存試劑。 實驗操作(zuo)中(zhong)請使用壹次(ci)性的(de)吸(xi)頭，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。
2. 加樣(yang)：加樣(yang)或(huo)加試劑時，請註意在吸取(qu)標(biao)本 / 標準品，酶(mei)結(jie)合物(wu)或(huo)底(di)物(wu)時(shi)，*個孔(kong)與(yu)zui後(hou)壹(yi)個孔(kong)加樣(yang)之(zhi)間的(de)時(shi)間間隔如(ru)果(guo)太(tai)大(da)，將會導(dao)致不(bu)同的(de) “預孵育(yu)”時(shi)間，從(cong)而(er)明(ming)顯(xian)地(di)影(ying)響到(dao)測(ce)量值(zhi)的(de)準確性(xing)及(ji)重復性。壹(yi)次加樣(yang)時(shi)間（包括(kuo)標準品及(ji)所(suo)有(you)樣品(pin)）控(kong)制(zhi)在(zai) 0分(fen)鐘內，如(ru)標本數(shu)量多(duo)，使用多道(dao)移(yi)液器加樣(yang)。
3. 孵(fu)育：為(wei)防止樣品蒸發(fa)，試驗時將反應(ying)板放(fang)於(yu)鋪(pu)有(you)濕(shi)布(bu)的(de)密(mi)閉盒(he)內，酶標(biao)板加上(shang)蓋或(huo)覆(fu)膜，以(yi)避(bi)免液體(ti)蒸發(fa)；洗(xi)板後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行下(xia)步操(cao)作(zuo)，任何時(shi)侯都(dou)應(ying)避(bi)免酶(mei)標(biao)板處於(yu)幹(gan)燥(zao)狀態(tai);同時應(ying)嚴(yan)格(ge)遵守(shou)給定(ding)的(de)孵(fu)育時間和溫(wen)度。
4. 洗(xi)滌：洗(xi)滌過程中(zhong)反應(ying)孔(kong)中(zhong)殘(can)留的(de)洗(xi)滌液應(ying)在(zai)濾(lv)紙(zhi)上(shang)充分(fen)拍幹(gan)，勿將濾(lv)紙(zhi)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)反應(ying)孔(kong)中(zhong)吸(xi)水(shui)，同時要(yao)消(xiao)除板底殘(can)留的(de)液體(ti)和手指(zhi)印，避(bi)免影(ying)響(xiang)zui後(hou)的(de)酶(mei) 標儀(yi)讀數(shu)。
5. 小(xiao)鼠甘(gan)油三酯(zhi)試劑配制(zhi)：Detection A及(ji)Detection B在(zai)使(shi)用(yong)前請手甩幾下(xia)或(huo)少時(shi)離(li)心(xin)處(chu)理，以(yi)使(shi)管壁(bi)或(huo)瓶蓋(gai)的(de)液體(ti)沈積(ji)到(dao)管底。標準品、檢(jian)測(ce)溶(rong)液A工作(zuo)液、檢(jian)測(ce)溶(rong)液B工作(zuo)液請依(yi)據(ju)所(suo)需的(de)量配(pei)置使用，並(bing)使用相(xiang)應(ying)的(de)稀(xi)釋(shi)液配制(zhi)，不(bu)能混淆。請配置標準品及(ji)工作(zuo)液，盡(jin)量不(bu)要微(wei)量配(pei)置（如(ru)吸取(qu)檢(jian)測(ce)溶(rong)液A時，壹次(ci)不要小(xiao)於(yu)0μl），以避(bi)免由(you)於不準確稀(xi)釋(shi)而(er)造成的(de)濃度誤差；請勿重復使用(yong)已稀(xi)釋(shi)過的(de)標(biao)準品、檢(jian)測(ce)溶(rong)液A工作(zuo)液或(huo)檢(jian)測(ce)溶(rong)液B工作(zuo)液。
6. 反應(ying)時(shi)間的(de)控(kong)制(zhi)：加入(ru)底(di)物(wu)後(hou)請定時觀察反應(ying)孔(kong)的(de)顏(yan)色變(bian)化(hua)（比(bi)如(ru)，每(mei)隔0分(fen)鐘），如(ru)顏(yan)色較(jiao)深(shen)，請提(ti)前加入(ru)終(zhong)止液終止反應(ying)，避(bi)免反應(ying)過強(qiang)從(cong)而(er)影響(xiang)酶標儀(yi)光密(mi)度讀數(shu)。
7. 底(di)物(wu)：底(di)物(wu)請避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)，在儲存和溫(wen)育時(shi)避(bi)免強(qiang)光直(zhi)接(jie)照射(she)。
建(jian)議(yi)檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)時均(jun)設雙孔(kong)測(ce)定(ding)，以(yi)保證(zheng)檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo)的(de)準確性(xing)。
如(ru)標本中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)含(han)量過高，請先稀(xi)釋(shi)後(hou)再測(ce)定(ding)，計(ji)算(suan)時請zui後乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。